昆虫における分散型動原体・局在型動原体の比較解析

昆虫分布着丝粒与局部着丝粒的比较分析

• 批准号: 12J10761
• 负责人: 二橋 美瑞子
• 金额: $ 2.53万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J10761/
• 关键词: 分散型動原体; 局在型動原体; 染色体; カイコ; ヨトウガ; Ndc80; ショウジョウバエ

動原体は、細胞分裂の際、複製された染色体を2つの新しい細胞に正確に分配する重要な役割を持つ。ヒトなど多くの真核生物では、動原体は染色体の一か所に局在しているが、複数の動原体が染色体中に散在する「分散型の動原体」の様式をもつ生物種も存在する。分散型動原体を持つ染色体は、切断された染色体断片が世代を超えて保持されるなど興味深い性質を持つが、局在型動原体に比べ、その仕組みについては不明な点が多い。昆虫では進化の過程で複数回分散型動原体が出現しており、中でも、カイコは遺伝子情報や遺伝子機能解析技術が進んでおり、昆虫の中で局在型動原体の知見が最も蓄積しているキイロショウジョウバエとも比較的近縁なため、分散型動原体の構造及びその進化の解明に適した材料である。局在型動原体の主要な構成タンパク質の中には、カイコゲノムで見つからないものも存在するため、カイコでは新規な動原体タンパク質も期待できる。本年度は、カイコ動原体遺伝子Ndc80と相互作用するタンパク質複合体の解析を目指し、まずエピトープタグ融合型Ndc80を恒常的に発現する培養細胞株の樹立に必要な抗生物質を探索した。ピューロマイシンが効果的に細胞を死滅させたため、ピューロマイシン耐性遺伝子を使ってベクターの作製に着手した。さらに、EGFPとNdc80の間に45アミノ酸のスペーサーを入れると、中期の染色体への局在がより明瞭になることが分かった。EGFPを発現するRNAi簡易培養細胞株BmN4-SID1で使用可能な蛍光タンパク質を探索したところ、赤色蛍光タンパク質の中でmcherryが利用可能であることを見出した。また、生体内でのNdc80の挙動を観察するため、mcherry- Ndc80遺伝子を導入した遺伝子組換えカイコを作出し、最初の1系統が年度末に得られた。

The correct allocation of chromosomes during cell division and replication is important for the maintenance of chromosomes in new cells. In many eukaryotes, the presence of multiple kinetosomes in one chromosome or multiple kinetosomes in the other chromosome is called "dispersed kinetosomes." The chromosome fragments of the dispersed type of kinetosomes are separated from each other, and the chromosome fragments are separated from each other, and the chromosome fragments are separated from each other. The evolution process of insects includes the appearance of multiple dispersed kinetotypes, the development of molecular information and molecular function analysis techniques, and the accumulation of knowledge of dispersed kinetotypes in insects. The main components of the protozoan are the presence of the protozoan in the middle of the body and the expectation of the protozoan in the body. This year, we will explore the antibiotics necessary for the establishment of cultured cell lines for the analysis of protein complexes and the constant development of fusion protein Ndc80. The results of the study were as follows: In addition, EGFP and Ndc80 have been used to detect the presence and absence of DNA. EGFP can be found in RNAi simple culture cell line BmN4-SID1. It is possible to explore the possibility of using red light in the medium of mcherry. Ndc80 activity in vivo is detected, mcherry-Ndc80 gene is introduced, sub-group is changed, and the first system is obtained at the end of the year.

项目成果

オモクローム色素合成の最新の知見―ショウジョウバエのパラダイムを超えて―

铬色素合成的最新发现 - 超越果蝇范式 -

• 发表时间: 2013
• 期刊: 蚕糸・昆虫バイオテック
• 作者: Suetsugu;et al.;他37名、Osanai-Futahashi;Mを含む);二橋美瑞子
• 通讯作者: 二橋美瑞子

TALENを用いたゲノム編集によるオモクローム系色素合成経路の解明

使用 TALEN 进行基因组编辑阐明单色色素合成途径

• 发表时间: 2014
• 作者: 二橋美瑞子;立松謙一郎;二橋亮;高須陽子;粥川琢巳;石毛太一郎;矢嶋俊介;田村俊樹;山本公子;瀬筒秀樹
• 通讯作者: 瀬筒秀樹

A visible dominant marker for insect transgenesis.

• DOI: 10.1038/ncomms2312
• 发表时间: 2012
• 期刊: Nature communications
• 影响因子: 16.6

Large scale full-length cDNA sequencing reveals a unique genomic landscape in a lepidopteran model insect, Bombyx mori.

• DOI: 10.1534/g3.113.006239
• 发表时间: 2013-09-04
• 期刊: G3 (Bethesda, Md.)
• 作者: Suetsugu Y;Futahashi R;Kanamori H;Kadono-Okuda K;Sasanuma S;Narukawa J;Ajimura M;Jouraku A;Namiki N;Shimomura M;Sezutsu H;Osanai-Futahashi M;Suzuki MG;Daimon T;Shinoda T;Taniai K;Asaoka K;Niwa R;Kawaoka S;Katsuma S;Tamura T;Noda H;Kasahara M;Sugano S;Suzuki Y;Fujiwara H;Kataoka H;Arunkumar KP;Tomar A;Nagaraju J;Goldsmith MR;Feng Q;Xia Q;Yamamoto K;Shimada T;Mita K
• 通讯作者: Mita K

Pigment synthesis pathway genes and their application to visible transgenic markers

色素合成途径基因及其在可见转基因标记中的应用

• 发表时间: 2012
• 作者: Osanai-Futahashi M;Tatematsu KI;Yamamoto K;Uchino K;Futahashi R;Tamura T;Sezutsu H
• 通讯作者: Sezutsu H