Development of new gene therapy for chronic granulomatous disease using Piggyback transposon

使用 Piggyback 转座子开发慢性肉芽肿性疾病的新基因疗法

• 批准号: 24791049
• 负责人: SHIGEMURA Tomonari
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24791049/
• 关键词: 慢性肉芽腫症; iPS細胞; トランスポゾン; PiggyBac; 遺伝子治療

We successfully generated induced pluripotent stem cells (iPSCs) from peripheral T cells of chronic granulomatous disease patient with CYBB gene mutation, using sendai virus vector carrying reprogramming factors OCT3/4, SOX2, KLF4, and c-MYC. In the same way, we generated corrected iPSCs derived from CYBB-transduced T cell using PiggyBac transposon.We confirmed expression of pluripotency markers (Oct4, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81, Nanog) by immunofluorescence assays. In addition, these iPSCs showed teratoma formation when injected into immunodeficient mice. These colonies could be differentiated to monocytes and neutrophils with AGM-3 stroma cells. Monocytes and neutrophils derived from non-corrected and corrected iPSCs were devoid of oxidase activity by DHR.These data suggest iPSCs modified by this method were difficult to maintain transgene expression.

我们利用仙台病毒载体携带重编程因子OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC，成功地从CYBB基因突变的慢性肉芽肿病患者外周血T细胞中获得诱导多能干细胞（iPSCs）。以同样的方式，我们使用PiggyBac转座子从cybb转导的T细胞中生成了校正的iPSCs。我们用免疫荧光法证实了多能性标志物（Oct4、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81、Nanog）的表达。此外，这些iPSCs在注射到免疫缺陷小鼠体内时显示畸胎瘤形成。这些菌落可与AGM-3基质细胞分化为单核细胞和中性粒细胞。从未校正和校正的iPSCs中获得的单核细胞和中性粒细胞缺乏氧化酶活性。这些数据表明，通过这种方法修饰的iPSCs难以维持转基因表达。

项目成果

PiggyBacトランスポゾンとiPS技術を組み合わせた慢性肉芽腫症に対する新たな遺伝子治療の開発

结合PiggyBac转座子和iPS技术开发慢性肉芽肿病新基因疗法

• 发表时间: 2013
• 作者: 齋藤章治;中沢洋三;平林耕一;松田和之;杉田完爾;小池健一;重村倫成
• 通讯作者: 重村倫成

接合菌特異的定量PCRによる血清診断法の確立骨髄移植後早期に播種性接合菌症を来したp67phox欠損型慢性肉芽腫症症例での検討 慢性肉芽腫症に対する新たな戦略の試み

建立使用接合菌特异性定量PCR的血清学诊断方法 对一例p67phox缺陷型慢性肉芽肿病病例进行调查，该病例在骨髓移植后早期发展为播散性接合菌病 尝试慢性肉芽肿病的新策略

• 发表时间: 2014
• 作者: Shoji Saito;Yozo Nakazawa;Miyuki Tanaka;Ryu Yanagisawa;Yasuhiro Maeda;Takeshi Inukai;Kanji Sugita;Matthew H Wilson;Cliona M Rooney;and Kenichi Koike;重村倫成
• 通讯作者: 重村倫成

PiggyBac トランスポゾンとiPS 技術を組み合わせた慢性肉芽腫症に対する新たな遺伝子治療の開発

结合PiggyBac转座子和iPS技术开发慢性肉芽肿病新基因疗法

• 发表时间: 2012
• 作者: 重村倫成;中沢洋三;松田和之;小池健一
• 通讯作者: 小池健一