Der calciumabhängige Ionenkanal TRPV6 Identifizierung der Kanal-Untereinheit und von damit assozierten Proteinen

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Ziel dieses Projektes ist die Aufklärung und Charakterisierung der biologisch aktiven Einheit des TRPV6 Ionenkanals in nativen Geweben. Hierbei soll das TRPV6 Membranprotein isoliert sowie die Zusammensetzung des funktionsfähigen Kanals untersucht werden. Das TRPV6 Protein, ein Membranprotein mit vermutlich sechs Transmembrandomänen und einer Porenregion zwischen dem 5. und 6. Segment, ist Untereinheit eines nichtspannungsabhängigen Kationenkanals. Durch die vitro Untersuchungen an Überexpressionssystemen konnte gezeigt werden, dass das TRPV6 Protein mit mindestens drei Proteinen, mit Calcium-Calmodulin, mit TRPV5 und S100A10-Annexin2 interagiert. Im Rahmen dieses Projektes soll jetzt in nativen Geweben und in Primärzellen der TRPV6 enthaltende Multiproteinkomplex unter Verwendung von affinitätschromatographischen Vorgehensweisen, Sacharosegradientenzentrifugationen, 2-dimensionaler Gelelektrophorese und Massenspektrometrie isoliert und identifiziert werden. Durch Crosslinking Versuche soll die Zusammensetzung des Proteinkomplexes weiter untersucht werden.