結膜線維芽細胞から角膜内皮細胞へのｄｉｒｅｃｔ　ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ

从结膜成纤维细胞直接重编程为角膜内皮细胞

• 批准号: 14J04985
• 负责人: 中川 卓
• 金额: $ 1.39万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J04985/
• 关键词: 角膜内皮細胞; 転写因子; ダイレクトリプログラミング; 角膜上皮細胞

mRNA-sequencingとAffymetrix社のExon arrayを用いた網羅的遺伝子発現解析により、角膜内皮特異的な転写因子を38抽出し、このうち、培養皮膚線維芽細胞や培養角膜上皮細胞で高発現だったもの等を除き、角膜内皮特異的な転写因子として11転写因子を同定した。これら11の転写因子のlentivirus vectorを、Invitrogen社のGatewayシステムを用いて作成した。Sanger sequenceにより、open reading frame全長がクローニングできたことを確認した。HEK293FT細胞を用いてウィルス粒子を作成し、10^5/ ml以上の力価が得られた。結膜線維芽細胞と皮膚線維芽細胞に11転写因子を遺伝子導入し、角膜内皮細胞への分化誘導を試みた。まず、11転写因子を同時に導入したが、角膜内皮様の敷石状細胞への形態変化を示さなかった。次に、11個の転写因子のうち、特に角膜内皮細胞で特異性が高く、角膜内皮細胞の発生において重要と報告されている複数の転写因子を導入したが、いずれの転写因子の組み合わせにおいても、角膜内皮様の敷石状細胞への形態変化を示さなかった。しかし、11転写因子は、角膜内皮細胞のマーカー遺伝子として、有望であり、今後の角膜内皮細胞の再生医療に資するものであると考える。

mRNA-sequencing and Affytrix Exon array are used to analyze gene expression, corneal endothelium-specific gene expression factors 38 and 11, respectively, in cultured skin fibroblasts and cultured corneal epithelial cells. The lentivirus vector of the 11-factor gene and the gateway system of Invitrogen were created in the middle of the process. Sanger sequence, open reading frame full length, identification HEK293FT cells were produced with a force of more than 10^5/ ml. Conjunctival vascular cells and skin vascular cells 11-factor gene transfer, corneal endothelial cells differentiation induction test. In addition, the 11-factor gene was introduced simultaneously, and the morphological changes of corneal endothelial cells were shown. In addition, 11 writing factors, especially corneal endothelial cells, are highly specific, important in the development of corneal endothelial cells, and a number of writing factors are introduced into the medium. The 11-factor gene expression in corneal endothelial cells is expected to increase in the future.

项目成果

The angiotensin II receptor antagonist, losartan, enhances regulator of G protein signaling 2 mRNA expression in vascular smooth muscle cells of Wistar rats

血管紧张素 II 受体拮抗剂氯沙坦增强 Wistar 大鼠血管平滑肌细胞中 G 蛋白信号调节因子 2 mRNA 的表达

• DOI: 10.1038/hr.2015.154
• 发表时间: 2016
• 期刊: Hypertens Res
• 影响因子: 5.4
• 作者: Wu Y;Nakagawa S;Takahashi H;Kawabata Y;Suzuki E;Uehara Y.
• 通讯作者: Uehara Y.

Toxicity of Topical Antifungal Agents to Stratified Human Cultivated Corneal Epithelial Sheets

• DOI: 10.1089/jop.2014.0044
• 发表时间: 2014-12-01
• 期刊: JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS
• 影响因子: 2.3
• 作者: Kimakura, Mikiko;Usui, Tomohiko;Amano, Shiro
• 通讯作者: Amano, Shiro

Angiopoietin-like 7 is an anti-angiogenic protein required to prevent vascularization of the cornea.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0116838
• 发表时间: 2015
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Toyono T;Usui T;Yokoo S;Taketani Y;Nakagawa S;Kuroda M;Yamagami S;Amano S
• 通讯作者: Amano S

Landscape of transcriptional regulatory regions in human corneal epithelial cells

人角膜上皮细胞转录调控区的景观

• 发表时间: 2015
• 作者: Suguru Nakagawa;Ryo Nakaki;Genta Nagae;Seitaro Nomura;Motoaki Seki;Hiroyuki Aburatani
• 通讯作者: Hiroyuki Aburatani