Ｓｒｃファミリーキナーゼ活性制御因子Ｐｒａｇｍｉｎの生理学的解析

Src家族激酶活性调节剂Pragmin的生理分析

• 批准号: 14J06406
• 负责人: 千田 淑惠
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06406/
• 关键词: Pragmin/Sgk223; C-terminal Src kinase; EPIYA motif; Cell motility; H. pylori; 胃がん; ピロリ菌; CagA; キナーゼ; Csk; Pragmin; EPIYA

胃がんの発症にはcagA遺伝子陽性ピロリ菌の感染が関与している。ピロリ菌はIV型分泌機構を介してCagAタンパク質を宿主胃上皮細胞内に送り込む。CagAはグルタミン酸 (E) -プロリン (P) -イソロイシン (I) -チロシン (Y) -アラニン (A) からなるEPIYAモチーフを有し胃上皮細胞内へ侵入後、EPIYAモチーフのチロシン残基がリン酸化される。CagAはチロシンリン酸化されたEPIYAモチーフを介して複数の細胞内分子と結合してその機能を脱制御する。一方、EPIYAモチーフを持つ哺乳類タンパク質として同定されたPragminはEPIYAモチーフのチロシンリン酸化依存的にCagAの標的分子の一つであるC-terminal Src kinase (Csk) と複合体を形成する。本研究ではPragmin-Csk複合体形成の機能的意義を明らかにすることを目的とした。PragminとCskの組換えタンパク質を用いたin vitro キナーゼ試験およびヒト胃上皮腺癌由来細胞AGSを用いた実験の結果、Pragmin-Csk複合体形成はCskを活性化し、CskによるPragminのチロシンリン酸化を促進することが明らかになった。チロシン残基に点変異を導入したPragminをCskと共にAGS細胞に発現させ、チロシンリン酸化量の変化を解析した結果、CskはPragminのEPIYAモチーフを含む3つのチロシン残基をリン酸化していた。それゆえPragmin-Csk複合体形成はCskの活性化の正のフィードバックループを形成すると考えられる。また、ヒト胃上皮腺癌由来MKN7細胞にPragminとCskを共発現させると、著しい細胞形態の伸長と細胞運動の促進が観察された。さらに免疫蛍光染色の結果、PragminとCskは接着斑に共局在していた。以上の結果から、Pragmin-Csk複合体形成とCsk活性化の正のフィードバックループの脱制御はがんの浸潤や転移につながる異常な細胞運動に関与する可能性があると考えられる。

Stomach disease and cagA infection are related to the infection of positive bacteria. The type IV secretion mechanism of the bacterium Bacteria is introduced into the CagA protein and is delivered into the host gastric epithelial cells. CagA はグルタミン acid (E) -プロリン (P) -イソロイシン (I) -チロシン (Y) -アラニン (A) After からなるEPIYA モチーフを has penetrated into the gastric epithelial cells, the residue of EPIYA モチーフのチロシン acidifies the される. CagA はチロシンリン acidification されたEPIYA モチーフを Introduction して complex の intracellular molecules と binding し て そ の function を decontrol す る. One side, EPIYA モチーフをhold つ mammal タンパク性として同定されたPragminはEPIYの一つであるC-terminal of the にCagAのtarget molecule that Aモチーフのチロシンリン acidification depends on Src kinase (Csk) complex is formed. The purpose of this study is to understand the significance of the formation function of the Pragmin-Csk complex. Pragmin と Csk の group replacement え タ ン パ ク quality を use い た in vitro Results of the test using AGS cells derived from gastric epithelial adenocarcinoma and Pragmin-Csk complex body shape Activation of Csk, activation of Csk, Pragmin of Csk, acidification and promotion of Csk. The difference between the チロシン residue and the にpoint difference is introduced into the したPragminをCskとにAGS cells に発appearsさせ、チロシンリンacidification amount の変Chemical analysis results, CskPragmin のEPIYA モチーフをcontaining 3つのチロシン residue をリン acidification していた. The formation of Pragmin-Csk complex is the activation of Csk. The origin of gastric epithelial adenocarcinoma is MKN7 cells. The results of immunofluorescence staining, Pragmin and Csk, and spots are all in the same area. The above results indicate that the Pragmin-Csk complex is formed and Csk is activated. The control of abnormal cell movement and the possibility of abnormal cell movement are controlled by infiltration and infiltration.

项目成果

Interaction of Pragmin, a H. pylori CagA-like mammalian EPIYA motif-containing protein, with the C-terminal Src kinase

Pragmin（一种幽门螺杆菌 CagA 样哺乳动物 EPIYA 基序含有蛋白）与 C 端 Src 激酶的相互作用

• 发表时间: 2014
• 作者: Sunagawa GA;Sumiyama K;Ukai-Tadenuma M;Perrin D;Fujishima H;Ukai H;Nishimura O;Shi S;Ohno R;Narumi R;Shimizu Y;Tone D;Ode KL;Kuraku S;Ueda HR.;千田淑惠
• 通讯作者: 千田淑惠