大腸癌幹細胞におけるＣｏｘの役割

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本研究では、大腸癌形成過程で、プロスタグランジンE2(PGE2)およびCox-1, Cox-2が、癌幹細胞維持のために果たす役割を検討した。具体的には、(1)Dclk1陽性癌幹細胞が産生するPGE2がオートクライン的に癌幹細胞自身の維持に影響するかを検討する。(2)PGE2のEP1～4受容体のうち、Dclk1陽性癌幹細胞維持のために必要な受容体を特定する。(3)EP受容体の下流で癌幹細胞維持に働く、新規因子を同定する。以上を検討項目とした。まず、3D cell cultureを用いたCox阻害剤投与実験で、濃度依存性にDclk1陽性癌幹細胞が減少することを示した。更にCoxの下流で働くPGE2の受容体(EP1～4)に対して、種々の受容体遮断薬を投与し、腫瘍抑制効果とDclk1陽性癌幹細胞の変化を解析した。その結果EP4阻害で、腫瘍の増大抑制とDclk1陽性癌幹細胞が減少した。3D cell cultureの実験系がin vivoを模倣し、そして実験系として妥当か検証するため、レポーター導入マウス(Dclk1-CreERT2; Rosa td-Tomato; ApcMinマウス)から作成した3D cell cultureに対し、4OH-Tamoxifenを使用した細胞系譜解析を行った。その結果、in vivo同様にDclk1陽性細胞が腫瘍幹細胞であると判断した。そこで、Cox-1,Cox-2およびEP4 signalが生体でもDclk1陽性癌幹細胞固有の維持機構に重要か、マウスを用い検証した。すなわち、Dclk1-CreERT2；EP4 flox/flox；ApcMin、Dclk1-CreERT2；COX-1 flox/flox；ApcMin、Dclk1-CreERT2；COX-2 flox/flox；ApcMin各マウスの作成に着手した。