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霊長類における神経幹細胞増殖能の比較解析－ｉＰＳ細胞による霊長類脳進化の探求－

灵长类神经干细胞增殖能力的比较分析 - 利用 iPS 细胞探索灵长类大脑进化 -

基本信息

批准号：
16J01275
负责人：
北島龍之介
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

【背景と目的】我々は霊長類における脳形成の分子細胞基盤とその種差を明らかにすることを目的とし、特に初期発生過程における神経分化の分子機序を明らかにするための手法をチンパンジーiPS細胞によって確立することを企画した。【方法】チンパンジーiPS細胞の神経分化の初期過程を追うべく、ニューロスフェア形成開始から1，3，5，7日目において、①RT-qPCRによる各種神経細胞マーカー遺伝子の発現量の定量化を行い、その経時的変遷を追った。併せて、②各タイムポイントのニューロスフェアをニューロン分化条件に移行し、2週間培養後、ニューロンの有無を免疫染色法によって確認した。【結果】OTX2は分化初期から発現しており、徐々に発現量が下がった。またPAX6およびZFP521は5日目から発現が見られた。これよりこの点は実際にニューロン産生がDay5のニューロスフェアから認められることからも支持された。加えて５日目から7日目にかけてNotchリガンドであるDLL1の発現が急激に上昇した。このDLL1の発現からも、本研究では５，７日目が神経幹細胞の非対称分裂期間に対応し、神経前駆細胞の産生が起こっていると考えられる。このことはFOXG1が７日目に最大の発現量を示すことからも支持された。【考察】本研究ではチンパンジーiPS細胞の神経分化過程において培養時間に応じた遺伝子発現の変遷が起こることを新規に見出した。その発現パターンは、マウスで報告されている時期及び領域特異的遺伝子の発現順序を再現する傾向にあった。従って本手法により今まで困難であった非モデル動物における発生の初期過程の比較解析が行える可能性が提示された。実際に本プロトコルはヒトiPS細胞にも適用可能であり、両種を並列した分化過程の比較解析を実施中である。

[background objective] We are concerned about the formation of molecular basis, cell cycle, and so on. [methods] in the early stages of the differentiation of iPS cells, there was a lot of research in the early stages of differentiation, and the beginning of the formation of the mythology. on the 5th, 7th and 7th days, all kinds of myths were used to quantify the amount of money needed to quantify the amount of money in the market, and to track it during the week. After 2 years of incubation, there was no immune staining method to confirm the differentiation condition. [results] in the early stage of differentiation of OTX2, it was found that there were significant differences between the two groups in the early stage of differentiation. Please PAX6 the ZFP521 for 5 days and you will see that there is a problem. We need to learn from the international community that we need to learn more about Day5. We need to support your health. Add 5