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標的分子と特異的に共有結合を形成する特殊ペプチドの探索

寻找与目标分子特异性形成共价键的特殊肽

基本信息

批准号：
16J05654
负责人：
小澤直也
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J05654/
关键词：
特殊ペプチドスクリーニング共有結合

项目摘要

本研究では、反応性官能基を持つ環状ペプチドライブラリーを構築し、標的との共有結合形成能力を指標としたスクリーニング法を確立することを目指している。今年度は、前年度のスクリーニングで発見したペプチドについてさらに詳細な評価を行うとともに、別のタンパク質を標的としたスクリーニングも実施した。まず、寄生虫由来のタンパク質と共有結合を形成することが確認されていた2種類のペプチドについて、結合部位を調べた。標的タンパク質をペプチドと反応させた後にプロテアーゼで分解し、断片をLC-MSで分析することで、ペプチドが結合しているアミノ酸残基を特定した。次に、これらのペプチドの一方をモデルとして、共有結合形成速度を合理的設計によって変更することを試みた。本研究で使用した反応性官能基は小さな置換基であるフッ素を導入することで構造変化を最小限にしながら脱離基の酸性度を容易に変更できるように設計されているため、ペプチドと標的タンパク質の間の共有結合形成速度を合理的設計によって容易に変更できると期待される。そこで、反応性官能基に含まれるフッ素の個数と位置を変化させた複数のペプチドを化学合成し、標的タンパク質と一定時間反応させた。脱離基の酸性度が高いほどペプチドが結合したタンパク質が増えたため、共有結合形成速度を合理的に変更できることが確認された。さらに、本研究の手法の汎用性を検証するためにEGFRを標的としたスクリーニングを行い、EGFRと共有結合を形成すると期待されるペプチドを1種類同定した。このペプチドを蛍光標識したものを化学合成し、EGFRと反応させてSDS-PAGEで分析したところ、EGFRが蛍光を示したため共有結合形成が確認された。また、他の3種類のタンパク質との反応も調べたところ、EGFRと選択的に反応することが確認された。

In this study, we established the index of the ability to form a common bond between the two functional groups. This year's annual report shows that the company has made a detailed evaluation of the company's activities and the quality of its products. The origin of the parasite and the formation of a common binding site are confirmed by the selection of two species and the adjustment of binding sites. The target protein was analyzed by LC-MS, and the protein was identified by DNA sequencing. The second, the third, the fourth, the In this study, we designed a novel functional group with a small substituent group, introduced it into the structure, minimized the structural change, easily changed the acidity of the free group, and reasonably designed the rate of formation of a common bond between the two groups. The number and position of the functional groups containing the amino acids are changed. The acidity of the base is high, and the quality of the base is high. The formation speed of the base is reasonable. In this study, we demonstrated the universality of EGFR target and EGFR consensus. The chemical synthesis of EGFR was confirmed by SDS-PAGE analysis. The three types of anti-inflammatory substances are identified as EGFR.