Innovative Extraktionstechniken für Mikroproben - Miniaturisierung der Arsenspeziesanalytik

微量样品的创新提取技术——砷形态分析的小型化

• 批准号: 5448005
• 负责人: Dr. Anne-Christine Schmidt
• 金额: --
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2004-12-31 至 2008-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5448005?language=en
• 关键词: Innovative; Extraktionstechniken; Mikroproben; Miniaturisierung; der

Die für das dritte Jahr des Projektes vorgeschlagene Thematik bezieht sich auf den im Erstantrag genannten letzten Arbeitspunkt „Nutzung der Extraktionsverfahren für biologisch relevante Substanzklassen“, wobei die Arbeiten auf arsenbindende oder arsenbeeinflusste Peptide und Proteine fokussiert werden sollen. So sollen in der zweiten Phase des Projektes zusätzlich zur Extraktion und Bestimmung von Arsenspezies in pflanzlichen Proben deren kovalente und nichtkovalente Bindungen an zellulären Biomolekülen analytisch erfasst und charakterisiert werden. Dazu können die bisher für Gesamtarsen und Arsenspezies entwickelten Extraktionsvarianten mit den zur Detektion von biomolekülgebundenen Arsenspezies gewonnenen Erkenntnissen zusammenfließen. Die Probenvorbereitung ist im Hinblick auf die Extraktion von Peptiden und Proteinen und deren möglichen Arsenbindungen aus pflanzlichen Geweben zu gestalten. Zur Charakterisierung verschiedener Arsen-Biomolekül-Komplexe sollen insbesondere die Größenausschluss-Chromatographie (size exclusion chromatography, SEC) und die zweidimensionale Gelelektrophorese (2D-GE) als Trenntechniken genutzt werden. In den SEC-Fraktionen sollen die Gesamtarsenkonzentrationen sowie die Arsenspezies off-line mittels ICPMS bzw. IC/ICPMS bestimmt werden. Dabei ist die SEC wegen ihrer geringen Trennleistung als Vorfraktionierung zu betrachten, deren Proteinfraktionen für eine zweite SEC-Trennung in einem weiter eingeschränkten Molmassenbereich oder für eine Trennung mittels 2D-GE vorgesehen sind. Die Proteinspots in den 2D-Gelen sollen dann hinsichtlich ihrer Gesamtarsengehalte nach Mikrowellenaufschluss und alternativ mittels Laserablation direkt aus dem Gel untersucht werden. Im Falle des Auffindens von Arsenbindungen in gelelektrophoretisch getrennten Proteinen sollen die entsprechenden Proteine enzymatisch verdaut und mittels HPLC/ESIMS charakterisiert werden.

Die für das dritte Jahr des Projektes vorgeschlagene Thematik bezieht sich auf den im Erstantrag genannten Arbeitspunkt“Nutzung der Extraktionsverfahren für biologisch relevante Substanzklassen”，whobei die Arbeiten auf arsenbindenden or der arsenbeeinflusste Peptide und Proteine fokussiert韦尔登focussiert.因此，在第二阶段的项目中，必须对砷的含量进行提取和测定，并对生物分子进行快速分析和特性韦尔登。Dazu können die bisher für Gesamtarsen und Arsenspezies entwickelten Extraktionsvarianten mit den zur Detektion von biomolekülgebundenen Arsenspezies gewonnenen Erkennnissen zusammenfließen.在Hinblick中提取肽和蛋白质，并从凝胶中分离出大量的砷。砷-生物分子复合物的特征可通过分子排阻色谱法（SEC）和二维凝胶电泳（2D-GE）等常规韦尔登技术来解决。在SEC-Fraktionen sollen die Gesamtarsenkonzentrationen sowie die Arsenspezies off-line mittels ICPMS bzw. IC/ICPMS评估韦尔登。Dabei ist die SEC wegen ihrer geringen Trennleistung als Vorfraktionierung zu betrachten，deren Protefraktionen für eine zweite SEC Trennung in einem weiter eingeschränkten Molmassenbereich or der für eine Trennung mittels 2D-GE vorgesehen sind. 2D凝胶中的蛋白质斑点可以通过微阵列或替代性的激光消融直接从凝胶中去除韦尔登。用凝胶电泳法测定砷结合蛋白质的含量，用HPLC/ESIMS韦尔登表征。