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細胞増殖・アポトーシスを制御できる光応答性転写因子の創出

创建可以控制细胞增殖和凋亡的光响应转录因子

基本信息

批准号：
17J00538
负责人：
中谷陽一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J00538/
关键词：
転写因子光遺伝学生物物理 LOVドメイン bHLH-ZIPドメイン

项目摘要

本研究では、bHLH-ZIP型転写因子の活性を光制御する新規手法の開発を目的とした。bHLH-ZIP型転写因子MAXは、二量体化して標的配列E-boxに結合することで、細胞増殖やアポトーシスに関与する遺伝子発現を調節している。このMAXの活性を光制御できれば、細胞内におけるMAXの機能を他の手法と比較して、可逆的・低侵襲的かつ高い時空間分解能でより詳細に調べることが可能になる。我々は、これまでの研究から、青色光受容体オーレオクローム(AUREO)が、青色光の受容に伴い二量体化することを明らかにしている（Y. Nakatani and O. Hisatomi, 2015など）。本研究では、このAUREOの変異体をMAXに融合することで、MAXの二量体化やDNA結合を光制御することを試みた。まず、AUREO変異体とMAXの融合タンパク質PA-MAXを作製し、in vitroでの機能評価を行った。融合位置が異なる10種類の融合タンパク質のうち、71番目の位置で融合した２種類のPA-MAXのみが暗状態で単量体化し、光依存的に二量体化してE-boxに結合した。円偏光二色性（CD）測定により、MAXの71番目のイソロイシン（Ile71）は、helix-loop-helix領域の二量体の安定性に貢献していると考えられた。そこで、この71番目の位置に着目して、部位特異的変異を加えたPA-MAXをさらに10種類作製した。中でも71番目のアミノ酸をメチオニンへと置換したPA-MAX変異体が、光依存的にE-box対する親和性を7.4倍増加させた。また、このDNA結合が、配列特異的であることも確認している。よって、本研究は、in vitroにおいてbHLH-ZIP型転写因子MAXの二量体化とDNA結合を光制御することに成功した。この研究内容については、現在論文作成中である。

In this study, the activity of bHLH- ZIP writing factor was used in the light control of new rules and techniques. The bHLH- ZIP type writing factor MAX, the arrangement of the two-dimensional template, the combination of the two-dimensional E-box, the cell culture, the cell culture, and the cell culture showed that there were significant differences between the two groups. The MAX active light system, the intracellular enzyme MAX machine can compare the other methods, and the reversible low-invasion high-temperature time-space decomposition can reduce the temperature and the temperature. We studied cyan photoreceptors (AUREO), cyan light tolerance (AUREO), cyan light tolerance (QR), cyan tolerance (Y. Nakatani and O. Hisatomi, 2015). In this study, we used the combination of AUREO, MAX, and Maxwell binary DNA combined with optical system. The computer, the AUREO system, the MAX system, the PA-MAX system, and the in vitro machine can be used to operate the computer. Fusion location 10, fusion location 10, location fusion 2, PA-MAX quantification, light-dependent binary E-box combination. The determination of polarized dichroism (CD), the determination of optical dichroism (CD), the determination of polarization dichroism (CD), the determination of polarization dichroism (CD), the determination of polarization dichroism (PDC), the determination of polarization dichroism (PDC), the determination of polarization dichroism (PDC), the determination of polarization dichroism (PDC), the determination of polarization dichroism (PDC) and the stability of binary bodies in the field of helix-loop-helix. The location of the target, and the location of the target, the location, the location and the location. In this paper, we study the characteristics of PA-MAX, light-dependent, and sex-dependent E-box particles. Make sure that you do not know what to do with the combination of the special DNA and the special information. In this study, in vitro, bHLH- ZIP writing factor, MAX, binarization, DNA and photographic system were used to determine the success of the writing factor. The content of the study is very important, and it is now in the process of writing the article.