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エピゲノム編集による脂肪細胞分化制御

通过表观基因组编辑控制脂肪细胞分化

基本信息

批准号：
18F18757
负责人：
稲垣毅
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-10-12 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18F18757/
关键词：
エピゲノム脂肪細胞分化制御脂肪細胞エピゲノム編集

项目摘要

本研究は、CRISPR-dCas9システムを基盤とするSunTag法を利用してヒストン修飾の人工的書き換えによる脂肪細胞分化制御を目指すものであり、ヒストンメチル化酵素の特定遺伝子領域へのリクルートメントに挑むものである。SunTag法を用いて脂肪細胞分化制御遺伝子の領域に複数のヒストン修飾酵素をリクルートすることで人工的に脂肪細胞分化を調節できる可能性を考慮し、昨年度より開始した発現ベクター作製に継続して取り組んだ。本研究に用いるSunTag法では、（１）guide RNA(gRNA)発現プラスミド、（２）不活性化Cas9 (dCas９)とGCN4の発現プラスミド、（３）ヒストン修飾酵素およびGCN4認識抗体の発現プラスミドの３種が必要となる。（３）の発現プラスミドの作製にあっては、ヒト型SETDB1の活性ドメイン（a.a. 570 - 1291）を含む配列、もしくは単純ヘルペスウイルス由来の転写活性化ドメインVP16 の 4 量体 VP64 の配列を導入した。これらのプラスミド作製においては、脂肪細胞分化過程における安定発現を可能とするため、レトロウィルス発現プラスミド骨格を使用した。作製したプラスミドは、PEIトランスフェクション法をもちいてPlatE細胞に遺伝子導入し、レトロウィルスを作製した。（１）、（２）、もしくは（３）のレトロウィルスを段階的に3T3-L1細胞に感染させたのち、各段階で抗生物質スクリーニングを実施して繰り返し、すべての要素を発現する安定発現細胞株を得ることに成功した。

In this study, CRISPR-dCas9 and SunTag methods were used to control the differentiation of fat cells in order to control the differentiation of human lipids and enzymes in specific fields. The SunTag method is based on fat cell differentiation system. In the field of fat cell differentiation, enzyme analysis is used to determine the possibility of artificial fat cell differentiation. Since the beginning of last year, it has been implemented since the beginning of last year. In this study, we used the SunTag method, (1) guide RNA (gRNA) to detect antigens, (2) inactivating Cas9 (dCas9) to detect antigens, (3) to modify enzymes, GCN4 to recognize antibodies, to detect antibodies, and to detect antibodies. (3) there is no significant difference in the activity of SETDB1 (A.A.) 570-1291) the reason for this is the cause of the activation of writing, the VP16 of 4-volume VP64, the input of the column. After the process of differentiation of fat cells, the process of differentiation of fat cells, the process of fat cell differentiation, fat cell differentiation, fat cell differentiation Make sure that you don't know what to do, PEI what you want to do, and how to make sure that you don't know what to do. If you don't know what to do, you won't know if you're going to make a mistake. (1), (2), (3) the 3T3-L1 cells in each segment were infected with bacteria, and the cells in each segment were successfully infected.