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Identification and analysis of novel signaling molecules regulating AM symbiotic pathway via D14 family genes

通过D14家族基因调控AM共生途径的新型信号分子的鉴定和分析

基本信息

批准号：
18J00182
负责人：
亀岡啓
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tohoku University (2020)Osaka Prefecture University (2018-2019)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はD14L/KAI2経路ではたらきAM菌共生を制御する新規植物ホルモン(KAI2 ligand; KL)・AM菌由来シグナル分子(Myc-factor for KAI2 pathway; Myc-K)の単離を目標としている。①シグナル分子単離のためのアッセイ系の確立と精製、②D14l2a, D14l2bの機能解析に加えて、①が困難だった場合のバックアッププランとして③ D14L/KAI2経路ではたらく転写因子のスクリーニングを計画していた。③の実験は初年度で完了し、①が順調なため③の実験は行わなかった。そのため、本年度は①の実験のみ行った。昨年度までにKLによって発現誘導されるミヤコグサDLK2の発現をqPCRで定量することによってKL活性を検出するアッセイ系を確立した。また、イネの種子に高いKL活性があることを発見し、イネ種子抽出物の精製を進めていた。本年度は、このアッセイ系に直接逆転写法という技術を導入することに成功した。直接逆転写法は龍谷大学の永野准教授らが開発した手法で、精製したRNAではなく植物破砕液を直接cDNA合成に用いることができる。これにより、アッセイの効率が大幅に改善された。また、イネ種子抽出物の順相・逆相のオープンカラム、HPLCによる精製条件を最適化し、高い活性を保ったまま抽出物を精製できる条件を見出した。化合物の単離には至らなかったものの、精製条件検討の過程で、抽出物だけでなく滲出物にもKLが含まれること、KLは単一の化合物ではなく複数の化合物がKL活性をもつこと、それらの化合物の中には中性物質と酸性物質が少なくとも１つずつ含まれることなど、これまで明らかになっていなかったKLの化合物としての性質を明らかにした。

In this study, D14L/KAI2 pathway was used to control the symbiosis of AM bacteria in order to control the origin of AM bacteria (KAI2 ligand; KL). The molecular weight (Myc-factor for KAI2 pathway; Myc-K) was isolated from each other. 1. Do you want to make sure that the 2D14l2a, the D14l2b machine is able to make sure that you have a problem? At the beginning of the year, the first year is over, and the first day is over. This year, we will pay more attention to this year. In the last year of the year, the KL system has been established. The DLK2 system has been established. The results show that the KL activity has been detected in the qPCR system. The activity of KL is very high and the extract from the seeds is refined and refined. This year's program is based on the direct reverse writing method and the introduction of technical skills into the successful market. Direct reverse writing method: professor Nagano, associate professor of Hiroya University, has opened a series of tricks, refined RNA techniques, plant breaker solutions, direct cDNA synthesis and direct cDNA synthesis. There has been a substantial improvement in the rate of improvement. The extract was extracted from the extract in the reverse phase, the condition was optimized by HPLC, the extract was highly active, and the extract was extracted from the extract. The compound is isolated to the compound, the refined condition is the process, the extract is the KL, the KL is the compound, the KL activity is complex, the neutral substance in the compound is less than the acid in the compound, the acid in the compound is less than that in the KL, the acid in the compound is less than that in the neutral compound. Please tell me that the compounds are KL, and that they are sexually active.