ゼブラフィッシュを用いた恐怖条件付け学習に必須な脳領域の遺伝学的研究

使用斑马鱼对恐惧条件学习至关重要的大脑区域进行遗传研究

• 批准号: 18J01686
• 负责人: 小久保 友理 (2019)
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J01686/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; 恐怖条件付け学習; 終脳; 情動; 遺伝子; Gal4-UAS

恐怖条件付け学習に必須な脳領域である終脳の背側内側部で発現するemx3遺伝子について、機能解析を進めてきた。CRISPR/Cas9法を用いてemx3遺伝子の機能破壊変異を三種類作製し、恐怖条件付け学習をはじめとする行動解析を行った。さらにemx3遺伝子を破壊し、同時に遺伝子発現をモニターするために、emx3遺伝子へCRISPR/Cas9法による相同組換えで酵母転写因子GAL4をノックインするための実験を行った。三種類のGAL4遺伝子のノックインラインを得ることができ、発生初期の終脳と成体の終脳の両方でレポーター遺伝子の発現が強い系統の樹立に成功した。作製したノックインフィッシュとUAS下流に任意の遺伝子を融合したコンストラクトを発現するトランスジェニックフィッシュと掛け合わせ、emx3発現神経細胞における機能を解析している。また、emx3変異体の表現型解析として脳の形態解析を行い、emx3変異体において異常な表現型を再現性良く得ることができた。

Terror conditions must be studied in the field of end-to-end and dorsal-to-medial development of emx3 genes, functional analysis and progress CRISPR/Cas9 is used to analyze the three types of functions of emx3. The same combination of EMX3 gene expression and EMX3 gene expression is used in the CRISPR/Cas9 method. Three types of GAL4 genes are successfully established in the early stages of development and in the final stages of development. The function analysis of EMX3 in the development of neurons is carried out by combining any gene downstream of UAS with the gene downstream of UAS. The phenotype analysis of emx3 variant was performed in the same way as that of emx3 variant.