質量分析法による原生生物の種組成解析に基づいた農業集落排水水質判定法の開発

开发一种基于质谱分析原生生物物种组成的农业社区废水质量测定方法

• 批准号: 21K19168
• 负责人: 石田 秀樹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19168/
• 关键词: 種組成; 質量分析; PCR; 走査型電子顕微鏡; 水凍結乾燥法; 質量分析法

本研究は排水施設の原生生物を迅速に同定分類し，水処理の状態を低コストで素早く判定するための基盤を構築することを目指している。コロナ感染症の影響により，対象施設が利用できず当初から別施設に変更して調査を行っていたが，変更後の施設でのデータが蓄積してきたため，このまま継続してデータ解析を続けることとした。研究の内容は大きく次の４つに分けられる．①サンプリングした原水の水質測定，②出現原生生物種の観察同定，③活性汚泥中の原生生物の遺伝情報解析，④活性汚泥中の原生生物の質量分析解析．水質測定については，排水施設では一般的に計測されている水質項目を網羅的にカバーしている．これらのデータは，水処理施設で従来の運転状況判断の根拠となるデータであり，さらに本実験で運転状況判断との比較をするべき重要な基礎データである．種同定については，光学顕微鏡観察のほかに水凍結乾燥法を用いた試料作製を行い，走査型電子顕微鏡で観察した。その結果，この排水施設は出現種がほぼ一般的な種で構成されていることが明らかになり，種組成もある程度一般化して考察することができると考えられる．遺伝情報を用いた迅速な種組成判定に関しては，原生生物用のユニバーサルプライマーを設計してPCRを行い，リボソーム18Sを中心とした遺伝情報の収集を行っている。今年度は解析結果が安定しつつあり，さらに，V9領域に着目することで，効率的に種分類がおこなえることが明らかになっており，原生生物の種組成を明らかにするうえで有効な手段となると考えられる．質量分析についてはまだ安定した解析結果が得られていない。一歩立ち返って，単離培養中の原生生物を試料として測定し，比較することで，違いを明らかにするところから進めている．

This study aims to identify and classify the protozoa in wastewater treatment facilities, and to determine the basic conditions of wastewater treatment. For example, if you want to change your mind, you can change your mind. The content of the study is very important. 1. Determination of raw water quality; 2. Identification of protozoa species; 3. Analysis of protozoa heritage information in activated sludge; 4. Analysis of protozoa quality in activated sludge. Water quality measurement, drainage facilities, general water quality measurement, water quality items, etc. The water treatment facilities are the basis for judging the operation status of water treatment facilities. In the same way, optical microscopy and water freeze-drying method were used to prepare samples, and scanning electron microscopy was used to observe them. As a result, the drainage facilities are generally composed of different kinds of water. The information is used to determine the composition of the species. The protozoan is used to design the PCR. The PCR is used to collect the information. This year's analysis results are stable, and the V9 domain is targeted. The species classification of the protozoa is targeted. The species composition of the protozoa is targeted. Quality analysis results are stable. The protozoa in culture were measured in step by step, and the results were compared.

项目成果

淡水産の微小生物（原生生物・藻類・小型動物）の SEM 観察のための試料作製法について

淡水微生物（原生生物、藻类、小动物）SEM观察的样品制备方法

• 发表时间: 2022
• 作者: MAY THAN THAR;HIROTAKA SAITO;TOMOTAKA SATO;YUJI KOHGO;AKIYOSHI IZUMI;小黒健太郎・ 松山祥大・加藤慶樹・広橋教貴;石田秀樹，松本知佳，山本晃生，洲崎敏伸;田代琴見・石塚哉史;石田秀樹
• 通讯作者: 石田秀樹

原生生物を無固定で走査型電子顕微鏡観察するための新規な水凍結乾燥法

一种无需固定的扫描电镜观察原生生物​​的水冷冻干燥新方法

• 发表时间: 2022
• 作者: MAY THAN THAR;HIROTAKA SAITO;TOMOTAKA SATO;YUJI KOHGO;AKIYOSHI IZUMI;小黒健太郎・ 松山祥大・加藤慶樹・広橋教貴;石田秀樹，松本知佳，山本晃生，洲崎敏伸
• 通讯作者: 石田秀樹，松本知佳，山本晃生，洲崎敏伸