Development of therapeutic application of beating cardiomyocytes derived from human adipose tissue for treating heart failure

本研究の学術的な「問い」は、「SVFに心筋誘導遺伝子Mef2cを導入したMef2c強発現SVFの投与が慢性虚血性心不全を改善させるか」、また「ヒトSVFもMef2cの導入により拍動心筋細胞に分化するか」である。検討1. ヒト臨床皮下脂肪サンプルを用いて、ヒトSVFを拍動心筋細胞に分化誘導させる方法を確立する。待機外科手術患者20例を対象に、手術時に生じた余剰皮下脂肪を採取。コラゲナーゼ処理ならびに遠心分離によりヒトSVFを得る。培養ディッシュにSVFを播種後、第5日目にレンチウイルスベクターを用いて、“心筋誘導遺伝子”MEF2Cを導入。28日後に分化誘導された「ヒト拍動心筋」特性について解析を行う。今年度は新型コロナウイルス感染症流行の影響で、新規患者のエントリーが滞った。来年度は引き続き症例を積み重ねていく予定である。検討2.ラット慢性虚血性心不全モデルにおける“心筋分化誘導遺伝子導入”SVF投与の心機能改善効果を明らかにする。αMHC-GFP Tgマウスの皮下脂肪からSVFを採取し、in-vitro で①PBS, ②SVF,③SVF+Mef2cの3群に分け、細胞播種後第5日目にそれぞれの「心筋分化誘導遺伝子」をレンチウイルスベクターを用いて導入する。day 10に回収、genetically-primed SVFを得る。野生型ラットに虚血再灌流モデルを作成し、4週後にgenetically-primed SVFを心筋虚血リスク領域の心筋内に直接投与する。細胞投与４週、８週後に心機能評価、組織評価を行い、心筋分化誘導遺伝子導入SVFの心機能改善効果、ホストにおける移植後in-vivo心筋分化効率を評価する。令和４年度はαMHC-GFP Tgマウスの繁殖が順調に進んだ。令和５年度は当初予定した実験を遂行できる見込みである。

本研究の学術的な「問い」は、「SVFに心筋誘導遺伝子Mef2cを導入したMef2c強発現SVFの投与が慢性虚血性心不全を改善させるか」、また「ヒトSVFもMef2cの導入により拍動心筋細胞に分化するか」である。検討1. ヒト臨床皮下脂肪サンプルを用いて、ヒトSVFを拍動心筋細胞に分化誘導させる方法を確立する。待機外科手術患者20例を対象に、手術時に生じた余剰皮下脂肪を採取。コラゲナーゼ処理ならびに遠心分離によりヒトSVFを得る。培養ディッシュにSVFを播種後、第5日目にレンチウイルスベクターを用いて、“心筋誘導遺伝子”MEF2Cを導入。28日後に分化誘導された「ヒト拍動心筋」特性について解析を行う。今年度は新型コロナウイルス感染症流行の影響で、新規患者のエントリーが滞った。来年度は引き続き症例を積み重ねていく予定である。検討2.ラット慢性虚血性心不全モデルにおける“心筋分化誘導遺伝子導入”SVF投与の心機能改善効果を明らかにする。αMHC-GFP Tgマウスの皮下脂肪からSVFを採取し、in-vitro で①PBS, ②SVF,③SVF+Mef2cの3群に分け、細胞播種後第5日目にそれぞれの「心筋分化誘導遺伝子」をレンチウイルスベクターを用いて導入する。day 10に回収、genetically-primed SVFを得る。野生型ラットに虚血再灌流モデルを作成し、4週後にgenetically-primed SVFを心筋虚血リスク領域の心筋内に直接投与する。細胞投与４週、８週後に心機能評価、組織評価を行い、心筋分化誘導遺伝子導入SVFの心機能改善効果、ホストにおける移植後in-vivo心筋分化効率を評価する。令和４年度はαMHC-GFP Tgマウスの繁殖が順調に進んだ。令和５年度は当初予定した実験を遂行できる見込みである。