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糖尿病黄斑浮腫に対する閾値下レーザー治療のモニタリングマーカー確立

阈下激光治疗糖尿病黄斑水肿监测标志物的建立

基本信息

批准号：
21K12762
负责人：
周尾卓也
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hokuriku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では，糖尿病黄斑浮腫の治療有効性をモニタリングできる分子マーカーとして，閾値下レーザーの標的分子と同調する細胞外液性因子を選別し，医用質量分析の多重反応モニタリング法に適用可能な候補を提案する．高分解能精密質量分析装置を利用して，ヒト網膜色素上皮のセクレトームをメタボロミクス法とプロテオミクス法によって探究している．ヒトiPS分化細胞を，透過膜に集密的に播種し，無血清培地中で40日間以上培養することで，敷石状で黒褐色の網膜色素上皮シートを調製した．臨床での高血糖値を想定したグルコース濃度の培地中で30日間以上培養することで，糖尿病モデル網膜色素上皮を調製した．閾値下レーザーの照射から12時間後まで，網膜色素上皮の培養上清液を，1時間毎に採取した．比較の対象を意図して，ブタ網膜色素上皮の培養を新たに開始した．培養上清中の代謝物を包括的に解析するために，高速液体クロマトグラフィーと連結した高分解能精密質量分析（四重極飛行時間型）装置でメタボロミクス法を実行した．細胞に共通する一次代謝を標的として，質量分析に供する培養上清の前処理条件（除タンパクや希釈倍率）と液体クロマトグラフィー条件を決定した．高分解能精密質量分析装置で検出した化合物に対して，多重反応モニタリングMRMのためのメソッド（プレカーサーイオンとそのプロダクトイオンの質量電荷比）を作成し，このメソッドを高感度高速質量分析（三連四重極型）装置に適用して，測定作業の効率化を図った．メタボロミクス法で得られた多変量データを，ウェブベースのMetaboAnalyst 5.0ソフトウェアを活用して，PCA主成分分析およびPLS部分的最小二乗回帰によって内容を分類した．

The purpose of this study is to analyze the effectiveness of the treatment of diabetic macular edema by analyzing the molecular formula and analyzing the sub-threshold criteria for macular edema. It is possible to select and classify extracellular fluid factors in the same manner and to propose a candidate for the possible application of the multiplex reaction method for medical quality analysis. High-resolution energy precision mass spectrometry device Utilized して, ヒトOmentum Pigment Epithelium のセクレトームをメタボロミクス法とプロテオミクス法によってExplorationしている. The iPS differentiated cells were sown densely through the membrane, cultured in serum-free soil for more than 40 days, and the omental pigment epithelium was prepared in a stone-like dark brown form. Clinical hyperglycemia is considered to be high, and the concentration is high, and the concentration is high, and the culture is more than 30 days. After 12 hours of subthreshold irradiation, omental pigment epithelium culture supernatant was collected and collected after 1 hour. Compare the image of the object and the culture of the omental pigment epithelium and start the new process. Analysis of metabolites included in the culture supernatant, high-speed liquid analysis and linkage High-resolution precision mass analysis (quadruple polarity time-of-flight type) device, Hi-Tech High Resolution Instruments. The cells share the same primary metabolic target, and the pre-treatment conditions of the culture supernatant for mass analysis (except for the magnification of the liquid) and the conditions of the liquid liquid are determined. High-resolution energy precision mass spectrometer, high-resolution compound compound, multiple reaction reagentタリングMRMのためのメソッド（プレカーサーイオンとそのプロダクトイオンのmass-to-charge ratio) is made, and the このメソッドを high-sensitivity high-speed mass analysis (triple quadruple pole type) device is applicable, and the efficiency of the measurement operation is improved. MetaboAnalyst 5.0ソフトウェアをutilizationして, PCA principal component analysisおよびPLS part of the least squares regression classificationによってcontentした．