Streptococcus mutansが関与する脳血管疾患発症機序の解明

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コラーゲン結合タンパクを発現するStreptococcus mutans（ミュータンス菌）感染と脳卒中発症との関連が報告されている。このコラーゲン結合タンパクは、細胞壁を構成するペプチドグリカンと共有結合し、ミュータンス菌最外層に存在している。一方、脳卒中罹患部からのミュータンス菌体単離の報告はないことから、菌体そのものではなく、菌体外に分泌、または剥離するコラーゲン結合タンパクが病原因子である可能性がある。これまでの研究成果として、ミュータンス菌培養上清中にコラーゲン結合タンパクを含む複合体をウェスタンブロッティング法で確認している。研究当該年度には、ミュータンス菌培養上清からコラーゲン結合タンパク複合体の単離・同定を試みた。その方策として、抗コラーゲン結合タンパクポリクローナル抗体を作製し免疫沈降法を行い単離を試みた。しかしながら、使用した抗体とミュータンス菌が分泌するグルコシルトランスフェラーゼが交差反応を示し、質量分析法によるコラーゲン結合タンパク複合体の同定を阻害することが判明した。この問題を解決するため、ミュータンス菌が有する3種類全てのグルコシルトランスフェラーゼ遺伝子を破壊したミュータンス菌株を作製した。この株の培養上清には抗体と交差反応を示すグルコシルトランスフェラーゼを全く含まないため免疫沈降法によるコラーゲン結合タンパク複合体単離を容易にする。その後の質量分析法による同定に資するサンプルが得られるはずである。