Streptococcus mutansが関与する脳血管疾患発症機序の解明

阐明变形链球菌脑血管疾病的发病机制

基本信息

批准号：
22K10352
负责人：
村田貴俊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10352/
关键词：
Streptococcus mutans 脳卒中コラーゲン結合タンパク

项目摘要

コラーゲン結合タンパクを発現するStreptococcus mutans（ミュータンス菌）感染と脳卒中発症との関連が報告されている。このコラーゲン結合タンパクは、細胞壁を構成するペプチドグリカンと共有結合し、ミュータンス菌最外層に存在している。一方、脳卒中罹患部からのミュータンス菌体単離の報告はないことから、菌体そのものではなく、菌体外に分泌、または剥離するコラーゲン結合タンパクが病原因子である可能性がある。これまでの研究成果として、ミュータンス菌培養上清中にコラーゲン結合タンパクを含む複合体をウェスタンブロッティング法で確認している。研究当該年度には、ミュータンス菌培養上清からコラーゲン結合タンパク複合体の単離・同定を試みた。その方策として、抗コラーゲン結合タンパクポリクローナル抗体を作製し免疫沈降法を行い単離を試みた。しかしながら、使用した抗体とミュータンス菌が分泌するグルコシルトランスフェラーゼが交差反応を示し、質量分析法によるコラーゲン結合タンパク複合体の同定を阻害することが判明した。この問題を解決するため、ミュータンス菌が有する3種類全てのグルコシルトランスフェラーゼ遺伝子を破壊したミュータンス菌株を作製した。この株の培養上清には抗体と交差反応を示すグルコシルトランスフェラーゼを全く含まないため免疫沈降法によるコラーゲン結合タンパク複合体単離を容易にする。その後の質量分析法による同定に資するサンプルが得られるはずである。

据报道，表达胶原结合蛋白的链球菌感染与中风发作之间的联系。该胶原结合蛋白与构成细胞壁的肽聚糖共价结合，并存在于B. utans的最外层。另一方面，没有关于将突变体与中风影响的区域分离出来的报道，因此可能是从细菌分泌或分离的胶原蛋白结合蛋白，而不是细菌本身，是致病因素。先前的研究结果已通过蛋白质印迹证实，以证实在细菌突变体培养上清液中含有胶原蛋白结合蛋白的复合物。在研究年，我们试图从沙门氏菌突变的培养上清液中分离并鉴定胶原蛋白结合蛋白复合物。作为一项措施，制备了抗胶原结合蛋白多克隆抗体，并使用免疫沉淀来试图隔离它们。然而，发现使用的抗体和沙门氏菌突变分泌的葡萄糖基转移酶表现出交叉反应性，并抑制了通过质谱法鉴定胶原蛋白结合蛋白复合物。为了解决这个问题，我们准备了一系列突变菌，该菌株破坏了B. mutans拥有的所有三种类型的葡萄糖基转移酶基因。该菌株的培养上清液不含与抗体交叉反应性的葡萄糖基转移酶，因此通过免疫沉淀促进了胶原蛋白结合蛋白复合物的分离。应获得样品，该样本将有助于通过质谱法进行后续鉴定。