細胞の冷温保存における保存温度見直しとアルゴン加圧溶解による保存可能期間延長効果

点击翻译按钮获取中文摘要

研究計画の遂行内容別に本年度の実績を報告する．1)冷温保存温度見直しの有効性：　能動輸送停止有りの4℃と無しの6℃で細胞試料を保存した時の細胞生存率の時間的変化を調べ能動輸送停止の有無による違いを検討した．細胞を35 mm 培養皿の底面に1日間単層培養した培養皿試料を4℃と6℃で3～24 h保存し保存後の細胞生存を水溶性ホルマザン産生法（WST-8アッセイ）により評価した．その結果，4℃よりも6℃の方が保存後の細胞生存率が高くなり，保存温度として6℃の有効性が示唆された．2)アルゴン(Ar)ガス加圧溶解による細胞保護効果：　6℃においてArガス加圧圧力 0.1～0.6 MPa（現有の圧力調整器の調整範囲）で培養皿試料を24 h保存することで適切な加圧圧力を検討した．その結果，Arガスの加圧溶解によって細胞保護効果が得られ，しかも，加圧圧力が高くなるにつれ効果も高くなることが明らかとなった．しかし，効果の程度としては最高圧力の0.6 MPaにおいてもあまり高くなかった．3)電気インピーダンス計測による細胞生存率推定：　実験系を構築し，冷温保存中の細胞の細胞生存率の測定を試みた．電極付きチャンバー（Alpha MED Scientific Inc. MEDプローブ 64電極）に1日間単層培養したものを試料とした．まず，電気インピーダンス計測システムを構築し，4℃の保存庫内で培養液中に保存中の細胞試料の電気インピーダンスの周波数特性（10～100 kHz，印加電流 10μA）の時間依存性を調べ，そして100 kHzで除した電気インピーダンス比率を求めそれを評価指標とした．その結果，その評価指標から細胞生存率が推定可能であることが示唆され，その指標を用いることで試料の状態の違いによる誤差を低減出来た．