Mechanism of life span extension via intercellular communication and its application to fermentation control

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本年度はA. 寿命延長分子の同定、 B. Mot1，Asr1の下流の因子の同定、C. 長寿命因子の下流因子の同定を行った。B、Cについては、より表現型が強いmot1-1に集中して解析を行った。AについてはKK268の培養上清を酢酸エチルで分画し、その親水性画分と疎水性画分の両方にWTの寿命を延長する活性があることを明らかとした。このことから寿命延長分子は少なくとも２種類あると考えられた。また疎水性画分については薄層クロマトグラフィーでさらに分画し、そのうちの１つの画分に含まれる物質についてNMRによる構造決定を行ったところ、その物質はチロソールであることが明らかとなった。チロソールを1 uM、10 uM、100 uMとなるようにWTの培養液に添加したところ、10 uMのチロソールを添加した場合にWTの寿命が延長した。このことから、KK268が分泌する寿命延長分子の１つはチロソールである可能性があることが分かった。B, CについてはKK268、mot1-1、およびWTにKK268、mot1-1の培養上清を添加して培養した菌体の全遺伝子発現解析（RNA-seq解析）を行った。その結果、KK268とmot1-1が寿命延長物質を分泌するのに関与する可能性がある遺伝子を11個、およびWTが寿命延長物質を受容し寿命延長するのに関与する可能性がある遺伝子13個を抽出した。これらの遺伝子についてはWT、KK268、mot1-1株において欠失株を作製中である。これらの遺伝子欠失株を迅速に作製するため、既存のCRISPR-Cas9システムを改良し、論文として報告した。