トラフグ口白症新規遺伝子産物を活用した感染機序の解明とワクチンの開発

口白症感染魚に特異的に発現する３つのRNA分節（Kuchijirosho-Associated RNA：KAR）について，1）KARのリコンビナントタンパク質の作製，および2）KARを利用したDNAワクチンの開発に関する研究を行った。具体的には以下のとおりである。1）各KAR- A,-B ,-CのcDNA断片をN末端にHisタグを付与する発現ベクターpET-22b(+)へ組み込み，4種類の大腸菌Escherichia coli株（BL21 DE3, BL21 DE3 pLysS, Rosetta gamiB, Rosetta gamiB DE3 pLysS）に導入し，リコンビナントタンパク質を合成した。その結果，発現プラスミドに導入されたKARsに由来するタンパク質（分子量：約50 kDa）が発現し，KAR-A,-B, -C の発現量にはE. coli 株による差異が確認された。また，ウエスタンブロッティングにより，抗Hisタグ抗体との抗原抗体反応が確認されたため，得られたタンパク質はKARに由来すると考えられた。今後は，このリコンビナントタンパク質をウサギに免疫して抗体を得る。2）KAR- A,-B ,-Cをそれぞれ組込んだ真核細胞発現プラスミドベクターをフグに筋肉注射後，DNAワクチンとしての効果を検証した。その結果，KAR-Aプラスミド区において，攻撃試験における死亡率が有意に低く，かつ生残魚の口白症の症状が他の試験区と比べて軽微であったが，全ての試験区の生残魚の脳からKARが検出され、その発現量は各区間で有意差がなかった。これらの結果から，KAR-Aプラスミドを接種したトラフグでは，口白症の重篤化を予防する効果が誘導されたと推察された。今後は，接種原をKAR-Aプラスミドに絞り，そのワクチン効果を詳細に検証する。

口白症感染魚に特異的に発現する３つのRNA分節（Kuchijirosho-Associated RNA：KAR）について，1）KARのリコンビナントタンパク質の作製，および2）KARを利用したDNAワクチンの開発に関する研究を行った。具体的には以下のとおりである。1）各KAR- A,-B ,-CのcDNA断片をN末端にHisタグを付与する発現ベクターpET-22b(+)へ組み込み，4種類の大腸菌Escherichia coli株（BL21 DE3, BL21 DE3 pLysS, Rosetta gamiB, Rosetta gamiB DE3 pLysS）に導入し，リコンビナントタンパク質を合成した。その結果，発現プラスミドに導入されたKARsに由来するタンパク質（分子量：約50 kDa）が発現し，KAR-A,-B, -C の発現量にはE. coli 株による差異が確認された。また，ウエスタンブロッティングにより，抗Hisタグ抗体との抗原抗体反応が確認されたため，得られたタンパク質はKARに由来すると考えられた。今後は，このリコンビナントタンパク質をウサギに免疫して抗体を得る。2）KAR- A,-B ,-Cをそれぞれ組込んだ真核細胞発現プラスミドベクターをフグに筋肉注射後，DNAワクチンとしての効果を検証した。その結果，KAR-Aプラスミド区において，攻撃試験における死亡率が有意に低く，かつ生残魚の口白症の症状が他の試験区と比べて軽微であったが，全ての試験区の生残魚の脳からKARが検出され、その発現量は各区間で有意差がなかった。これらの結果から，KAR-Aプラスミドを接種したトラフグでは，口白症の重篤化を予防する効果が誘導されたと推察された。今後は，接種原をKAR-Aプラスミドに絞り，そのワクチン効果を詳細に検証する。