Comprehensive analysis of bovine endometrial miRNAs and its function in the embryo elongation.

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、近年細胞間の情報伝達において重要性が指摘されているmiRNAに着目し、子宮内miRNAのウシ胚伸長に対する機能的役割を明らかにすることを目標とする。令和4年度はRNAseq解析によりウシ子宮内膜miRNAの網羅的解析を行った。その結果、卵胞期、黄体期および着床期でそれぞれ374個、398個および728個もmiRNAが確認された。GO機能エンリッチメント解析の結果、それぞれのステージで発現が上昇したmiRNAのターゲット遺伝子の多くは細胞構成成分、中でも細胞質、細胞膜、膜貫通型タンパク質の機能に関与するものであった。また、胚伸長に関与するmiRNAを同定するため、黄体期と着床期で発現するmiRNAの比較を行った。その結果、変化倍率が1.5倍以上かつ片方のステージで1000リードを越えるmiRNAは合計35個確認された。その内、黄体期で発現が高いmiRNAは既知が14個、着床期で高いものは既知が19個、新規が2個であった。これらのmiRNAは胚性因子によって制御され、胚伸長に関与している可能性が示唆された。さらに、子宮内に存在するエクソソーム（Exo）が胚に与える影響を調べるため、ウシ胚由来の培養栄養膜細胞(BT細胞)を用いてその影響を解析した。ウシ子宮灌流によって回収したExoを蛍光標識してBT細胞の培地中に添加したところ、ExoがBT細胞に取り込まれていることが確認された。また、Exo無添加区では小胞が消失していたのに対し、Exo添加区では小胞構造が維持されていた。qPCRの結果、Exo添加区においてPCNAおよびCCND1遺伝子の発現量が有意高い値を示した（P<0.05）。これらの結果から、子宮内Exoが胚の生存性および遺伝子発現に対して影響を与える可能性が示唆された。