Analysis of lipid domains around receptor tyrosine kinases by super-resolution microscopy

通过超分辨率显微镜分析受体酪氨酸激酶周围的脂质结构域

• 批准号: 22K06609
• 负责人: 阿部 充宏
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06609/
• 关键词: 受容体型チロシンキナーゼ; EGFR; 脂質ラフト; ホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸; 超解像顕微鏡; 一分子イメージング; 脂質ドメイン; 細胞膜

過去の生化学的な解析から、受容体型チロシンキナーゼは、脂質ラフトに局在することが示唆されていた。本研究では、「脂質プローブ」と「超解像顕微鏡法」とを組み合わせることにより、受容体型チロシンキナーゼが脂質ラフトに局在するか、受容体型チロシンキナーゼが脂質ラフト中の脂質によって活性制御されるか、を明らかにすることを目的とする。本年度は、代表的な受容体型チロシンキナーゼであるEGFRが、どの脂質ドメインに存在するかを調べるために、EGFRと脂質プローブとの共局在解析を超解像顕微鏡によって行った。脂質プローブとして、SMに対してはEquinatoxin II、クラスター化したSMに対してはLysenin、SM/Chol複合体に対してはNakanori、Cholに対してはD4H、ホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸 (PIP2) に対してはPLC delta-PH、ホスファチジルイノシトール3,4,5-トリスリン酸 (PIP3) に対してはGRP1-PH、ホスファチジルセリン (PS) に対してはevectin2-PHを用いた。超解像顕微鏡の共局在率はRipley’s bivariate K-functionで評価した。その結果、EGF刺激前には、EGFRはPIP2と高い頻度で共局在が観察された。ところが、EGF刺激後には共局在が低下することが分かった。一分子イメージング法でも検証した結果、同様の結果が得られた。この共局在の低下は、PLC gammaによって、EGFR周囲のPIP2が分解されるためであることが示唆された。また、EGFR以外の受容体型チロシンキナーゼについて、ヒトのcDNAから50種類以上をクローニングし、次年度以降の超解像顕微鏡による解析のための準備を行った。

In the past, biochemical analysis, receptor type, lipid type, and lipid type showed that The purpose of this study is to combine lipid metabolism and super-resolution microscopy with lipid metabolism and lipid metabolism. This year, the representative receptor type, EGFR, lipid, and lipid are present in the analysis of the super-resolution micro-mirror. Lipid-containing compounds such as Equinatoxin II, SM, Lysenin, SM/Chol, Nakanori, Chol, D4H, PIP2, PLC delta-PH, PIP3, GRP1-PH, GRP2-PH, GRP3-PH, GRP4-PH, GRP5-PH, GRP6-PH, GRP7-PH, GRP8-PH, GRP9-PH It is also used in evectin2-PH for (PS). A review of Ripley's bivariate K-function of superresolution micromirrors As a result, before EGF stimulation, EGFR and PIP2 were both observed at high frequencies. After EGF stimulation, the total situation is low. A molecular test method is used to test the results, and the same results are obtained. This is the first time that the system has been broken down, PLC gamma, EGFR cycle PIP2. The preparation for the analysis of more than 50 kinds of receptor types other than EGFR and super-resolution micromirrors in the next year is carried out.