蛍光アセチルコリンセンサーによる細胞内コリン伝達系の実証

使用荧光乙酰胆碱传感器演示细胞内胆碱传输系统

• 批准号: 22K06637
• 负责人: 宇和田 淳介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06637/
• 关键词: ムスカリン受容体; GPCR; トランスポーター; アセチルコリンセンサー; 循環置換GFP; Gタンパク質共役型受容体; acetylcholine

ムスカリン受容体を含むGタンパク質共役型受容体は、通常細胞の表面に局在し、細胞外からのリガンドを受容して活性化を受ける。我々はアセチルコリンをリガンドとするムスカリンM1受容体が細胞の内部にも局在し、活性化されうることを明らかにしている。この研究では、細胞の内部でムスカリンＭ１受容体が活性化される様子を直接的に検出する系を確立し、そのメカニズムの全容に迫る目的で行われた。細胞内で活性化される様子を検出するためにＭ１受容体に循環置換GFPを導入し、活性化に伴う蛍光の増加を呈するセンサーとした。今年度は、試験的に得られていたセンサーを改良し、細胞内局在性と活性化に伴う応答の安定した新しいセンサーを開発した。改良の際には、循環置換GFPの導入位置によって、蛍光変化量と細胞内局在性が大きく影響を受けることが分かり、結果的に多くの試作を行う必要が生じた。最終的に得られた同センサーを用いることで、細胞内Ｍ１受容体の活性化が、リガンドの細胞膜透過性の有無により影響を受けることを確認した。つまり、脂溶性が高く細胞膜を容易に透過するアゴニストは細胞内Ｍ１受容体を活性化し、水溶性が高く細胞膜透過性の低いアゴニストは細胞表面のＭ１受容体のみを活性化する。更に細胞膜透過性のない内因性リガンドであるアセチルコリンが、特定のトランスポーターによって細胞内へ輸送され、細胞内Ｍ１受容体を活性化する様子を確認した。更に、この活性化を可能とするトランスポーターについては、ヒトとマウスで一部異なる結果を得ており、現在その原因について解析を進めている。

The receptive body contains the co-operative receptacle, which is usually located on the surface of the cell, and the extracellular receptor is active. We need to know that the M1 acceptor is in the cell and is active in the cell. The purpose of the study is to make sure that the M1 receptacle is active, and that it is necessary to make sure that the system is established, and that the full capacity is required. The intracellular activation of the receptor M1 receptor was followed by the activation of the GFP receptor, and the activation of the receptor was induced by the addition of light. In the current year, the quality of the market has been improved, and the intracellular bureau has been sexually active in response to the stability of the market and the opening of the market. The improvement of the information system, the placement of the GFP in the environment, and the amount of light in the cell are subject to the distribution of the information system, and the results of the multi-test results are necessary for health care. The most effective method is the same as that of the receptor, the activation of the M1 receptor, and the membrane permeability of the receptor. The cell membranes of high fat-soluble and fat-soluble cells are easy to be activated by intracellular M1 receptors, water-soluble high cellular membrane permeability, low cell membrane permeability and cell surface activation. The cell membrane permeability test is related to the nature of the cell membrane, which is caused by the internal cause of the disease, the cell cycle, the specific cell cycle, the intracellular M1 receptor, and the activation of M1 receptor in the cell. More and more information may be required to improve the performance of a computer system. The results of a computer program have been improved. Now, the cause analysis is in progress.