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免疫寛容プラットフォームとしてのラット胸腺髄質の上皮細胞欠損領域の解析

大鼠胸腺髓质上皮细胞缺陷区作为免疫耐受平台的分析

基本信息

批准号：
22K06797
负责人：
沢登祥史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

以下の小項目番号は申請書の研究実施計画に基づく。「I-A: mEFAの組織学的解析」および、「II-A: mEFA細胞群のプロテオミクス解析」に記載されたmEFAに存在する細胞の単離と同定を行った。免疫組織化学解析からmEFAに局在すると予想されたCD103陰性新規DC候補細胞を単離しmRNAを抽出し、マイクロアレイ解析した。対照として、既知のcDCサブセットおよび脾臓のCD103陰性新規DC候補細胞を解析した。その結果、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現する遺伝子として、Mmp14やApoc1などが見出された。この内Mmp14に対する抗体を購入しフローサイトメトリーを行い、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現することを見出した。しかし、免疫染色ではMMP14発現は必ずしもmEFAに限定されず、さらなる細胞の探索が必要であることが示唆された。「II-B: 線維芽細胞のトランスクリプトーム解析」を行うために、線維芽細胞の単離を試みた。しかし、市販のPDGFRb抗体はいずれも免疫組織化学染色では良好な染色を呈するが、フローサイトメトリー上では染色できないために、単離は難しいという結論に達した。現在、CD45陰性ストローマ細胞全体をソートし、シングルセル解析することにより線維芽細胞を含む胸腺ストローマ細胞全体のトランスクリプトーム情報を得ることを目指し、実験が進行中である。「I-B: 質量顕微鏡によるmEFAの低分子マッピング」を進めるため、胸腺組織を質量顕微鏡で解析した。複数のマトリクスを用いて測定を繰り返し、髄質に存在する低分子化合物の候補としてホスファチジルセリン(36:1)およびオクソトリコシル酸などを同定した。また、以上の結果の一部を第51回2本免疫学会学術集会（2022年12月、熊本）にて報告した。

The following sub-project numbers are the basis of the application for research and implementation plan. "I-A: Histological analysis of mEFA" and "II-A: Analysis of mEFA cell population" describe the existence of mEFA and the identity of mEFA cells. Immunohistochemical analysis of CD103-negative DC candidate cells For example, the analysis of CD103-negative DC candidate cells was carried out in the presence of known CD103 cells. The results showed that CD103-negative DC candidate cells in thymus were found to be specific for the expression of Mmp14 Apoc1. The Mmp14 antibody was purchased and the CD103 negative DC candidate cells were found Immunostaining for MMP-14 is necessary for the detection of mEFA, and it is necessary for the detection of MMP-14. "II-B: Analysis of cell growth and development of cell growth and development." Immunohistochemical staining for PDGFRb antibodies was good, and the results were satisfactory. Now, CD45-negative cells are in progress. I-B: Mass Microscopy Analysis of mEFA Low Molecular Weight The determination of the presence of low molecular weight compounds in the presence of complex molecules is based on the following criteria: Report on the 51st Session of the 2nd Immunology Society Academic Conference (Kumamoto, December 2022)