糸球体毛細血管の変性・再生過程：FIB-SEMトモグラフィーを活用した解明

肾小球毛细血管的变性和再生过程：使用 FIB-SEM 断层扫描进行阐明

• 批准号: 22K06799
• 负责人: 市村 浩一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06799/
• 关键词: 糸球体毛細血管; 血管新生; 糸球体発生; 糸球体病理; ボリュームSEM; 糸球体; 内皮細胞; ボリューム電顕; 3D再構築

病態糸球体では毛細血管が病勢に応じて変性・再生を繰り返しており、これを評価することは病態を把握する上で重要なはずである。変性・再生の評価には、毛細血管網の特徴的な3D構造と断面構造を電顕解像度で同時に可視化することが理想的であるが、従来の電顕技術ではこれを行うことは難しい。このため、糸球体疾患の診断における毛細血管の病理評価は手薄になっている。本研究の目的は、従来の制約を克服した電顕イメージング技術（FIB-SEM）を活用することで、糸球体毛細血管の3D再構築と連続断面観察を行い、この毛細血管の変性・再生の形態プロセスを明らかにすることにある。R4年度は主に発生期における糸球体毛細血管の新生過程をラットにおいて明らかにした。糸球体発生の各ステージのFIB-SEM連続断面像（50 nm厚、800枚）から、毛細血管網の3D再構築を行った。血管系の発達様式には枝分かれ型 (branching type) と嵌入型 (intussusceptive type) があるが、糸球体毛細血管がどちらの様式で形成されるかは分かっていなかったが、3D再構築解析の結果から両方の様式により糸球体毛細血管が形成されていくことを示すことができた。また、嵌入型新生が起こる場合には、メサンギウム細胞の突起が嵌入に関与することも分かった。さらに、疾患時おける糸球体毛細血管の変性・再生過程の検討のため、ラットのメサンギウム増殖性腎炎モデル（Thy-1腎炎、GBM抗体腎炎、ハブ毒腎炎）の作製を進めており、安定的に試料をえることができるようになった。これらの試料をR5年度以降にFIB-SEM解析を進めていくことになる。

Pathological si sphere で は capillary が attempt に 応 じ て - sex, renewable を Qiao り return し て お り, こ れ を review 価 す る こ と は pathological を grasp す る で important な は ず で あ る. - sex, renewable の review 価 に は, blood capillary net の な 3 d structure と section of 徴 を electric 顕 resolution で す に visualization at the same time る こ と が ideal で あ る が, 従 の 顕 technology で は こ れ を line う こ と は difficult し い. <s:1> ため, <s:1> diagnosis of spheroid disorders における, <s:1> pathological assessment of capillaries 価 ため thinness of hands になって る る. は の purpose, this study 従 to の を overcome し た electric 顕 イ メ ー ジ ン グ technology (FIB - SEM) を use す る こ と で, si sphere capillary の 3 d to build と even 続 section line 観 examine を い, こ の capillary の - sex, renewable の form プ ロ セ ス を Ming ら か に す る こ と に あ る. In the R4 year, the <s:1> main に development period における spheroidal capillary process をラットにお て て light ら に に た た. The spheroid distribution <s:1> each ステ ジ <s:1> FIB-SEM is connected to the 続 cross-sectional image (50 nm thick, 800 pieces) ら, and the 3D reconstruction of the capillary network <e:1> を rows った. The vascular system is of the following patterns: に れ branching type (branching type) と embedding type (intussusceptive type) が あ る が, si sphere capillary が ど ち ら の others type で form さ れ る か は points か っ て い な か っ た が, 3 d to build analytical results の か ら struck party の others type に よ り si capillary が sphere formation さ れ て い く こ と を shown す こ と が で き た. ま た, embedded type new が こ る occasions に は, メ サ ン ギ ウ ム の processes が embedded に masato and す る こ と も points か っ た. さ ら に, disorders お け る si sphere capillary の - sex, regeneration process の beg の 検 た め, ラ ッ ト の メ サ ン ギ ウ ム raised colonization nephritis モ デ ル nephritis (Thy - 1, antibody of GBM nephritis, ハ ブ poison nephritis) を into the の cropping め て お り, stable に sample を え る こ と が で き る よ う に な っ た. <s:1> れら <s:1> sample を from R5 to later にFIB-SEM analysis を into めて く く く とになる とになる とになる.