甲状腺濾胞性腫瘍の術前細胞診断を可能とする53BP1発現型の定量解析

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【目的】本研究では、術前の穿刺吸引細胞診（液状化細胞診）検体における53BP1発現型解析結果と甲状腺濾胞性腫瘍診断の関連性を明らかにする。さらに各症例毎の遺伝子変異の特徴と53BP1発現型との関係を解明する。特にDNA損傷応答関連分子の遺伝子異常との関係を明らかにすることで、53BP1発現異常の誘導機序を考察する。【方法】臨床的に濾胞性腫瘍が疑われ採取された穿刺吸引細胞診検体（細胞診実施後の残余検体）を収集し、盲検的前向き解析を行う。53BP1発現型解析：細胞診用固定液に保存された検体を用いて、53BP1とKi-67による蛍光二重免疫細胞化学を実施し、画像解析ソフトにより定量的に解析する。53BP1発現型と術後病理診断結果とを突合し、分類された各パターンに最適な重み付け（係数）を決定するため、ロジスティック回帰モデルを用い、最適な診断予測モデルを構築し、診断精度を算出する。遺伝子解析：核酸保存液に保存された検体を用いる。核酸抽出キットを用いてDNAとRNAを抽出し品質確認後、キャプチャーシークエンス法による遺伝子変異解析を行う。遺伝子解析には、甲状腺癌の診断に有用とされるドライバー遺伝子のうち特に検出率の高い20種の遺伝子に加えて、発がんへの関与が知られているDNA損傷応答関連遺伝子を含むオーダーメイドのがん遺伝子パネルを用いる。これまでに甲状腺濾胞性腫瘍が疑われ手術が施行された65症例の穿刺吸引細胞診検体を収集し、53BP1とKi-67による蛍光二重免疫細胞化学を実施し解析を進めている。同時に核酸抽出も進めており、遺伝子解析可能な核酸が抽出できることを確認している。