肝臓マクロファージサブセット解析から迫る新規線維化亢進NASHマウスの病態解明

通过肝巨噬细胞亚群分析阐明新型纤维化 NASH 小鼠的病理学

• 批准号: 22K07005
• 负责人: 長井 良憲
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07005/
• 关键词: 非アルコール性脂肪性肝炎; マクロファージ; 腸内細菌; 線維化; 腸内細菌叢

①肝臓マクロファージサブセットの組織内局在と動態の解析：NASH誘導食又は普通食を4,8,12,24週間自由摂餌させ、肝臓のパラフィン包埋切片及び凍結切片を作製した。Ly6CとCD11cの免疫組織染色を確立し、肝臓におけるLy6C+細胞とCD11c+細胞の位置関係を解析した。その結果、CD11c+細胞は肝細胞周囲に網目状に集積し、いわゆる王冠様構造を示した。一方、Ly6C+細胞は脂肪滴を中心とした周りにドーナツ状の炎症性構造を示した。さらに蛍光染色により、NASH誘導食摂餌マウスの肝臓において、CD11c+細胞はコラーゲン線維と共局在することを見出した。②肝臓マクロファージサブセットにおける炎症・線維化関連遺伝子の発現解析：Ly6C+細胞とCD11c+細胞を単離後、炎症・抗炎症又は線維化関連遺伝子をqPCR法で測定することを目的とした。しかし、qPCRに供するには両サブセットの細胞数は非常に少なく、qPCRは実施せず、③の網羅的解析で検討することとした。その結果、CD11c+細胞には多数のケモカイン受容体が高発現することを明らかにした。③肝臓マクロファージサブセットの網羅的遺伝子解析：Ly6C+細胞とCD11c+細胞をセルソーターにより単離し、次世代シークエンス解析に供し、両サブセットに特徴的な遺伝子群を探索した。その結果、CD11c+細胞には線維化や肝星細胞の活性化に関わる遺伝子が高発現していた。一方、Ly6C+細胞には抗炎症性又は組織修復関連の遺伝子が高発現することが分かった。④3-F miceの腸内細菌叢及び腸管粘膜バリアの解析：抗生剤投与により腸内細菌叢を攪乱し、3-F miceのNASH病態や肝臓マクロファージサブセットの動態に与える影響を解析した。その結果、バンコマイシン投与によりNASH病態の悪化とCD11c+細胞の肝臓への顕著な浸潤を認めた。

(1) Dynamic analysis of liver tissue: NASH induced and normal diet were prepared at 4, 8, 12, and 24 weeks. Immunohistochemical staining of Ly6C and CD11c was established, and the positional relationship between Ly6C + cells and CD11c + cells was analyzed. CD11c + cells were found to be mesh-like in the periphery of hepatocytes, and crown structures were also observed. A side, Ly6C + cells fat drop in the center of the week, like inflammatory structure. In addition, NASH induced apoptosis in the liver, CD11c + cells, and the development of the disease were observed. 2. Analysis of the expression of inflammation and linear maintenance related genes in liver diseases: Ly6C + cells and CD11c + cells were isolated, inflammation and anti-inflammatory diseases were detected by qPCR. The number of cells in the system is very low, and the analysis of the system is very low. As a result, CD11 c+ cells are highly expressed in most of the receptors. (3) Gene analysis of liver cancer: Ly6C + cells and CD11c + cells are used to analyze the characteristics of liver cancer. As a result, CD11 c+ cells are highly developed for maintenance and activation of hepatocytes. Ly6C + cells have both anti-inflammatory and tissue repair related genes. 4. Analysis of intestinal flora and intestinal mucosa changes of 3-F rice: Analysis of the effects of antibiotic administration on intestinal flora and NASH pathological changes of 3-F rice. The results showed that NASH pathological changes and CD11 c+ cell liver infiltration were identified.

项目成果

新規NASHモデルマウス“3-Fマウス”の炎症・線維性変化に与える抗生剤投与の影響

抗生素给药对新型NASH模型小鼠“3-F小鼠”炎症和纤维化变化的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: 葛西海智;多田有希;五十嵐直哉;渡辺志朗;市村-清水真祐子;常山幸一;古澤之裕;長井良憲
• 通讯作者: 長井良憲

Analysis of liver macrophage subsets in a novel dietary mouse model of non-alcoholic steatohepatitis, “3-F mice”.

新型非酒精性脂肪性肝炎饮食小鼠模型“3-F 小鼠”中肝脏巨噬细胞亚群的分析。

• 发表时间: 2022
• 作者: Tada Y;Kasai K;Makiuchi N;Tsuneyama K;Nagai Y
• 通讯作者: Nagai Y

Isoliquiritigenin Attenuates Adipose Tissue Inflammation and Metabolic Syndrome by Modifying Gut Bacteria Composition in Mice

• DOI: 10.1002/mnfr.202101119
• 发表时间: 2022-03-28
• 期刊: MOLECULAR NUTRITION & FOOD RESEARCH
• 影响因子: 5.2
• 作者: Ishibashi, Riko;Furusawa, Yukihiro;Nagai, Yoshinori
• 通讯作者: Nagai, Yoshinori

非アルコール性脂肪性肝炎の新規モデルマウス“3-Fマウス”における腸内細菌叢及び胆汁酸組成の解析

新型非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型“3-F小鼠”的肠道菌群和胆汁酸组成分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 葛西海智;古澤之裕;多田有希;五十嵐直哉;渡辺志朗;藤坂志帆;戸邉一之;市村-清水真祐子;常山幸一;長井良憲
• 通讯作者: 長井良憲

Impact of changes of the gut microbiota on the development of liver inflammation and fibrosis in a novel dietary mouse model of non-alcoholic steatohepatitis, “3-F mice”.

肠道微生物群的变化对新型非酒精性脂肪性肝炎饮食小鼠模型“3-F 小鼠”肝脏炎症和纤维化发展的影响。

• 发表时间: 2022
• 作者: Kasai K;Furusawa Y;Tada Y;Igarashi N;Tsuneyama K;Nagai Y
• 通讯作者: Nagai Y