消化器癌における血中循環腫瘍細胞のクラスター化阻害に着目した新規治療開発

开发专注于抑制胃肠癌循环肿瘤细胞聚集的新疗法

• 批准号: 22K07185
• 负责人: 三輪 武史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07185/
• 关键词: CTC; α3NaK; 胃癌; 膵癌; マウスモデル; 血中循環腫瘍細胞; Naポンプ; マウスCTCアッセイ; 強心配糖体

これまで大腸癌、肝細胞癌、胃癌細胞株を用いた細胞株レベルでのα3NaKの発現と、アノイキス回避におけるα3NaKの機能について検証してきた。癌細胞の遊離（Detach）操作の際のα3NaKの原形質膜への移行が重要な役割を果たしていると考え、まずは膵癌細胞株の通常のAttach状態とDetach状態を再現し、そのα3NaKの発現を確認した。細胞表面ビオチン化を行い、膵癌細胞株であるPanc1とMIAPaca2を使用して原形質膜のα3NaK発現を比較し、Attach状態ではPanc1とMIAPaca2どちらも、α3NaKの発現認めず、Detach状態ではα3NaKが細胞表面の原形質膜へ移動していることが確認できた。さらに免疫染色でのα3NaKの局在変化について確認した。MIAPaca2を使用してα3NaKを蛍光抗体で染色したところ、Attach状態の膵癌細胞株では主に、細胞質内、核の周囲にα3NaKは分布しており、Detach状態にした細胞では原形質膜（細胞表面）にドット状に分布を認めた。マウスCTCモデル作成においては、ヌードマウスにMIAPaca2を使用して皮下腫瘍を作成し、6～8週間後に心臓採血を行うモデルを作成した。マウス血を溶血処理し、抗マウスCD45抗体を用いてマウス細胞をネガティブセレクションすることでCTCを濃縮モデルを確立。腫瘍生着率75%、CTC採取率43%の精度でCTCを回収し得た。マウスモデルより回収したCTCに対して、α3NaKの発現を確認し、蛍光抗体法にて原形質膜にドット状に分布することを確認、Detach状態として矛盾ない結果を確認した。今後、強心配糖体作用下でのα3NaK発現について検証する。

This is the case with colorectal cancer, hepatocellular carcinoma, and gastric cancer cell lines. Cell lines are used to detect the presence and function of α 3 NaK. The migration of protoplasma membrane of α 3NaK during detachment operation of cancer cells is important. The results show that the normal Attach state and Detach state of cancer cells are reproduced, and the occurrence of α 3NaK is confirmed. Cell surface protoplasmalemma is in the process of transformation, cancer cell line Panc1 and MIAPaca2 are used, protoplasmalemma α3NaK is detected, attached state Panc1 and MIAPaca2 are detected, detached state α 3 NaK is detected, protoplasmalemma on cell surface is moved, confirmed. Immunostaining for α3-NaK was performed to confirm the presence of α3-NaK. MIAPaca2 was stained with α3NaK and attached to the cytoplasm and nucleus of cancer cell lines. α3NaK was distributed in the cytoplasm and nucleus of cancer cells. The CTC is prepared by using MIAPaca2 and collecting blood from the heart after 6 - 8 weeks. The anti-CD45 antibody was used to purify the cells. The tumor survival rate was 75%, CTC recovery rate was 43%, and CTC recovery rate was 75%. The detection of α 3-NaK in CTC, the detection of α3-NaK in plasma membrane, the detection of α3-NaK in plasma membrane, the detection of α 3-NaK in CTC, the detection of α 3-NaK in plasma membrane, and the detection of α 3-NaK in plasma membrane. In the future, α3NaK can be detected under the action of cardiac glycosides.

项目成果

強心配糖体を用いたCTC制御機構の解明

使用强心苷阐明 CTC 控制机制

• 发表时间: 2023
• 作者: 藤井拓人;沼田佳久;清水貴浩;奥村知之;藤井努;酒井秀紀
• 通讯作者: 酒井秀紀