消化器癌における血中循環腫瘍細胞のクラスター化阻害に着目した新規治療開発

これまで大腸癌、肝細胞癌、胃癌細胞株を用いた細胞株レベルでのα3NaKの発現と、アノイキス回避におけるα3NaKの機能について検証してきた。癌細胞の遊離（Detach）操作の際のα3NaKの原形質膜への移行が重要な役割を果たしていると考え、まずは膵癌細胞株の通常のAttach状態とDetach状態を再現し、そのα3NaKの発現を確認した。細胞表面ビオチン化を行い、膵癌細胞株であるPanc1とMIAPaca2を使用して原形質膜のα3NaK発現を比較し、Attach状態ではPanc1とMIAPaca2どちらも、α3NaKの発現認めず、Detach状態ではα3NaKが細胞表面の原形質膜へ移動していることが確認できた。さらに免疫染色でのα3NaKの局在変化について確認した。MIAPaca2を使用してα3NaKを蛍光抗体で染色したところ、Attach状態の膵癌細胞株では主に、細胞質内、核の周囲にα3NaKは分布しており、Detach状態にした細胞では原形質膜（細胞表面）にドット状に分布を認めた。マウスCTCモデル作成においては、ヌードマウスにMIAPaca2を使用して皮下腫瘍を作成し、6～8週間後に心臓採血を行うモデルを作成した。マウス血を溶血処理し、抗マウスCD45抗体を用いてマウス細胞をネガティブセレクションすることでCTCを濃縮モデルを確立。腫瘍生着率75%、CTC採取率43%の精度でCTCを回収し得た。マウスモデルより回収したCTCに対して、α3NaKの発現を確認し、蛍光抗体法にて原形質膜にドット状に分布することを確認、Detach状態として矛盾ない結果を確認した。今後、強心配糖体作用下でのα3NaK発現について検証する。

これまで大腸癌、肝細胞癌、胃癌細胞株を用いた細胞株レベルでのα3NaKの発現と、アノイキス回避におけるα3NaKの機能について検証してきた。癌細胞の遊離（Detach）操作の際のα3NaKの原形質膜への移行が重要な役割を果たしていると考え、まずは膵癌細胞株の通常のAttach状態とDetach状態を再現し、そのα3NaKの発現を確認した。細胞表面ビオチン化を行い、膵癌細胞株であるPanc1とMIAPaca2を使用して原形質膜のα3NaK発現を比較し、Attach状態ではPanc1とMIAPaca2どちらも、α3NaKの発現認めず、Detach状態ではα3NaKが細胞表面の原形質膜へ移動していることが確認できた。さらに免疫染色でのα3NaKの局在変化について確認した。MIAPaca2を使用してα3NaKを蛍光抗体で染色したところ、Attach状態の膵癌細胞株では主に、細胞質内、核の周囲にα3NaKは分布しており、Detach状態にした細胞では原形質膜（細胞表面）にドット状に分布を認めた。マウスCTCモデル作成においては、ヌードマウスにMIAPaca2を使用して皮下腫瘍を作成し、6～8週間後に心臓採血を行うモデルを作成した。マウス血を溶血処理し、抗マウスCD45抗体を用いてマウス細胞をネガティブセレクションすることでCTCを濃縮モデルを確立。腫瘍生着率75%、CTC採取率43%の精度でCTCを回収し得た。マウスモデルより回収したCTCに対して、α3NaKの発現を確認し、蛍光抗体法にて原形質膜にドット状に分布することを確認、Detach状態として矛盾ない結果を確認した。今後、強心配糖体作用下でのα3NaK発現について検証する。