Bloom症候群モデルマウスを用いた血液腫瘍発症を予防する遺伝子治療前臨床試験

使用布卢姆综合征模型小鼠预防血液肿瘤发展的临床前基因治疗研究

• 批准号: 22K07295
• 负责人: 伊川 泰広
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07295/
• 关键词: レンチウイルス; Bloom症候群; 遺伝子治療

本研究は血液腫瘍を中心とした発がん性が高いBloom症候群に対して、予防的遺伝子治療を行うことで血液腫瘍の発症を抑制することにある。Bloom症候群の細胞は遺伝子治療で必須となるサイトカイン刺激下でアポトーシスを起こすため、遺伝子導入効率を上昇させるためのサイトカイン刺激を行うことができない。そこで、サイトカイン刺激を省いても高率に遺伝子導入を行うことができるようにenvelopeを変更することとした。既報に準じて、VSVg envelopeに代わってBaboon envelopeによりpseudotypingしたBlm遺伝子を搭載したレンチウイルスベクターを作成する。しかし、Baboon envelopeを用いてpsedotypingを試みると、ウイルス産生細胞であるHEK293T細胞は形態変化を起こし、ウイルス産生量が1/1000まで減少することを我々は明らかにした。2022年度は、ウイルス産生を行う際のプロトコールを改変し、ウイルスを大量に産生させ保存することに成功した。ウイルス産生プロトコールの改変点は以下の２点である。１点目は、Poly-L-Lysinを細胞培養プレートの底面に使用することで、剥がれやすくなったHEK293T細胞を剥がれにくくした。そうすることで、ウイルス産生効率を2倍上昇させることに成功した。また、Baboon envelope plasmid量を1.2倍量に変更しtransfectionすることで、ウイルス産生量が5-10倍上昇した。私たちが樹立した改変プロトコールで、ウイルス産生効率を約20倍まで上昇させることに成功した。

In this study, patients with high Bloom syndrome were diagnosed in the center of this study, and the preventive treatment was performed. In the treatment of Bloom syndrome, it is necessary to treat the patients with chronic hepatitis B. under the stimulation of the symptoms and signs of the patients with the syndrome of the disease, it is necessary to treat the children with the syndrome of the syndrome. the children of the syndrome must be treated by stimulation. In order to stimulate the province, there is a high rate of infection in the province. The number of children in the line is higher than that of the envelope group. Both the standard and VSVg envelope instructions are Baboon envelope, pseudotyping, Blm, and so on, so that you can make sure that you have done it. For example, you can use the psedotyping cell, the HEK293T cell, the HEK293T cell, the cell. In the year 2022, the number of students who were born in the year 2022 was significantly higher than that in the year 2022. The following two o'clock is the following two o'clock. 1 dot, Poly-L-Lysin cell culture, cell culture, bottom surface, peel, peel, HEK293T, peel, peel, peel Please tell me that the birth rate is twice as high as that of successful students. The amount of Baboon envelope plasmid is 1.2x, and the quantity of transfection is 5-10 times higher than that of the control. The rate of birth is about 20 times higher than the rate of success.

项目成果

Characterization of Genomic Instability in Hematopoietic Stem Cells of Blmtm3Brd/tm3Brd Mice for Pre-clinical Trial of Lentiviral Gene Transfer to Prevent Bloom Syndrome Related Hematological Malignancy

Blmtm3Brd/tm3Brd 小鼠造血干细胞基因组不稳定性的表征，用于慢病毒基因转移预防布卢姆综合征相关血液恶性肿瘤的临床前试验

• 发表时间: 2023
• 作者: Kazuhiro Noguchi;Yasuhiro Ikawa;Mika Takenaka;Yuta Sakai;Toshihiro Fujiki;Rie Kuroda and Taizo Wada
• 通讯作者: Rie Kuroda and Taizo Wada

Protocol for a high titer of BaEV-Rless pseudotyped lentiviral vector: Focus on syncytium formation and detachment

高滴度 BaEV-Rless 假型慢病毒载体方案：关注合胞体形成和脱离

• DOI: 10.1016/j.jviromet.2023.114689
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Virological Methods
• 影响因子: 3.1
• 作者: Noguchi Kazuhiro;Ikawa Yasuhiro;Takenaka Mika;Sakai Yuta;Fujiki Toshihiro;Kuroda Rie;Chappell Maxwell;Ghiaccio Valentina;Rivella Stefano;Wada Taizo
• 通讯作者: Wada Taizo