Bloom症候群モデルマウスを用いた血液腫瘍発症を予防する遺伝子治療前臨床試験

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本研究は血液腫瘍を中心とした発がん性が高いBloom症候群に対して、予防的遺伝子治療を行うことで血液腫瘍の発症を抑制することにある。Bloom症候群の細胞は遺伝子治療で必須となるサイトカイン刺激下でアポトーシスを起こすため、遺伝子導入効率を上昇させるためのサイトカイン刺激を行うことができない。そこで、サイトカイン刺激を省いても高率に遺伝子導入を行うことができるようにenvelopeを変更することとした。既報に準じて、VSVg envelopeに代わってBaboon envelopeによりpseudotypingしたBlm遺伝子を搭載したレンチウイルスベクターを作成する。しかし、Baboon envelopeを用いてpsedotypingを試みると、ウイルス産生細胞であるHEK293T細胞は形態変化を起こし、ウイルス産生量が1/1000まで減少することを我々は明らかにした。2022年度は、ウイルス産生を行う際のプロトコールを改変し、ウイルスを大量に産生させ保存することに成功した。ウイルス産生プロトコールの改変点は以下の２点である。１点目は、Poly-L-Lysinを細胞培養プレートの底面に使用することで、剥がれやすくなったHEK293T細胞を剥がれにくくした。そうすることで、ウイルス産生効率を2倍上昇させることに成功した。また、Baboon envelope plasmid量を1.2倍量に変更しtransfectionすることで、ウイルス産生量が5-10倍上昇した。私たちが樹立した改変プロトコールで、ウイルス産生効率を約20倍まで上昇させることに成功した。