深海放線菌が産生する新規の胃癌抑制物質の同定

深海放线菌产生的新型胃癌抑制剂的鉴定

• 批准号: 22K07308
• 负责人: 瀬良 知央
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07308/
• 关键词: スキルス胃癌; 放線菌

深海性放線菌からのスキルス胃癌に対する新規治療薬開発を目的として、共同研究者が培養に成功した190種の深海性放線菌ライブラリー中で32種の深海性放線菌の培養上清中にスキルス胃癌を含め胃癌細胞3株以上の増殖抑制作用を示すことを準備試験で確認していた。令和4年度では、さらにそこから検討を重ねることで16種に絞り込み、活性物質の精製法確立を行った。C18固相抽出にてそれぞれの放線菌種に適切な極性を当教室独自のスキルス胃癌細胞株含めた胃癌細胞株3株にて確認。細胞株横断的に再現性を認めることを確認し、さらに既存の放線菌由来抗癌剤であるマイトマイシン、アドリアマイシンも同時に固定抽出を行い、16種の深海性放線菌ライブラリーとは異なる分画での抑制を認めた。これにより16種の放線菌上清の活性物質が既存2種とは異なる新規抗癌活性物質であることが示唆された。また16種の放線菌上清をpHで分けて液液分画を行い、それぞれの放線菌上清のおおよそのpHを推定した。さらにまずは3種の放線菌上清をC18系Preparative HPLCシステムにて分析し、認めたピークを抽出し胃癌細胞株3株にて活性評価を行い、うち1種は癌増殖抑制を呈するピークがほぼ単一になるまで精製するに至った。他2種では胃癌細胞株で増殖抑制は認めず、その理由としてHPLCでの分離解析において200-400nmの波長で実施したが、400nm以降に活性物質が潜んでいる可能性があり、また現状のHPLCでは糖類は抽出できず、薄層クロマトグラフィー等を活用し評価を進めていく。

The co-investigators successfully cultured 190 species of deep-sea actinomycetes, including 32 species of deep-sea actinomycetes, and demonstrated their inhibitory effects on proliferation of gastric cancer cells containing more than 3 strains. In the fourth year of the year, the purification method of 16 kinds of active substances was established C18 solid-phase extraction was used to isolate the strains of gastric cancer cells, including 3 gastric cancer cell lines, with appropriate polarity. The reproducibility of cell line transection was confirmed, and the origin of existing actinomycetes was confirmed. The inhibition of 16 species of deep-sea actinomycetes was identified. There are 16 kinds of active substances in the supernatant of radioactive bacteria, 2 kinds of existing active substances and 2 kinds of new anti-cancer active substances. The pH value of supernatant of 16 kinds of bacteria was estimated. The supernatant of three kinds of radioactive bacteria was analyzed by C18 system Preparatory HPLC. Three gastric cancer cell lines were extracted and evaluated for activity. One kind of tumor growth inhibition was analyzed by HPLC. Two of them were identified for growth inhibition of gastric cancer cell lines, reasons for separation and analysis by HPLC at wavelengths of 200-400nm, and possibilities for active substances below 400nm.