The role of non-parenchymal cells on the pathogenesis for NASH

非实质细胞在 NASH 发病机制中的作用

• 批准号: 22K07987
• 负责人: 国府島 庸之
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07987/
• 关键词: NASH; hCLS; 線維化; 非実質細胞

NASH症例の肝生検検体よりmRNAを抽出して、糖・脂質代謝関連遺伝子、線維化関連遺伝子、酸化ストレスや小胞体ストレス関連遺伝子、サイトカイン/ケモカインなどの免疫関連遺伝子、線維化関連遺伝子などの発現解析を行なったところ、脂質代謝関連遺伝子、β酸化関連、酸化ストレス関連遺伝子の発現が著明に亢進していることが確認された。次に肝生検組織の病理学的特徴と各種遺伝子発現変化との関連について検討を行なったところ、Fibrosisにおいて、CXCL8、CXCL10等のケモカインの遺伝子発現が優位に増加することが確認された。hCLSの程度と組織のSteatosisおよびInflammationは有意な相関を認めるとともに、トランスアミナーゼと線維化マーカーであるP-Ⅲ-Pが有意に相関していた。hCLSの程度は一部のサイトカイン/ケモカインとともにCol1A1などの細胞外基質の遺伝子発現とも有意な相関を認めており、hCLSがNASH病態進展における炎症、線維化の起点となっている可能性が示唆された。MC4R-KOマウスに高脂肪・高コレステロール飼料を負荷したNASHマウスを作成し、組織学的に確認されたhCLSより非実質細胞を採取する手技の確立を行なった。hCLSの位置情報を残した状態で採取するために、NASHマウスに蛍光標識したF4/80抗体を経静脈投与後にサンプリングし、その未固定肝組織をビブラトームで薄切標本とし、hCLSが視認できることを確認した。hCLSの抽出方法については、バキューム方式のマイクロダイセクションであるUnipicKを用いることで、hCLSを回収することに成功した。分散条件、吸引条件などの検討を重ね、生存率を確保した状態でhCLSを構成する非実質細胞を回収する実験系を確立した。

从NASH病例的肝活检标本中提取mRNA，并分析与糖过程的代谢相关基因的表达，纤维化相关基因，氧化应激和内质胁迫胁迫基因，细胞因子/细胞因子/因子/趋化基因以及纤维化相关的基因，以及与纤维化相关的基因，以及与纤维的相关基因和纤维息肉相关，并具有与之相关的基因，并具有与之相关的基因，并具有与之相关的基因，并具有与之相关的基因，并具有与之相关的基因，并具有与纤维化相关的基因，并具有与纤维化相关的基因，并具有与纤维化相关的基因和纤维化。与脂质代谢相关的基因，与β氧化相关和氧化应激相关基因的基因。接下来，我们研究了肝活检组织的病理特征与基因表达的变化之间的关系，并证实趋化因子（例如CXCL8和CXCL10）的基因表达在纤维化中主要增加。 HCls的程度与组织脂肪变性和炎症之间存在显着相关性，而跨激酶和纤维化标记P-III-P显着相关。 HCls的程度与细胞外基质（例如COL1A1）以及一些细胞因子/趋化因子的基因表达显着相关，这表明HCls可能是NASH发病机理中炎症和纤维化的起源。用含有高脂肪的高脂肪胆固醇饮食的MC4R-KO小鼠制备NASH小鼠，并建立了一种从组织学确认的HCL中收集非核细胞的技术。为了收集HCLS位置信息，在静脉内施用荧光标记的F4/80抗体后，对NASH小鼠进行采样，并使用纤维状态将未固定的肝组织切成薄片，以确认HCLS可以视觉上可见。至于HCLS的提取方法，我们通过使用基于真空的微解析Unipick成功恢复了HCL。在反复检查分散条件和抽吸条件后，我们建立了一个实验系统，在该系统中，在确保生存率的同时，收集了组成HCls的非副作用细胞。

项目成果

肝非実質細胞に注目した閉経後NASHの発症・増悪メカニズムの検討

以肝脏非实质细胞为研究对象的绝经后NASH发病和恶化机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 青柳知美;鈴木秀生;高橋基;井本効志;東夕喜;大野あかり;黒川美穂;田代茂樹;合谷孟;田中正剛;国府島庸之;小川佳宏
• 通讯作者: 小川佳宏