权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Elucidation of pathogenesis of interactable lung diseases associated with dysregulated lipid metabolism

阐明与脂质代谢失调相关的相互作用性肺部疾病的发病机制

基本信息

批准号：
22K08229
负责人：
高宮里奈
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

今年度は、ホスファチジルコリンの分解からコリン合成経路に関わるリン脂質分解酵素PNPLA6の発現の高い、肺癌細胞株(A549、H157細胞)、乳癌細胞株(MDA-MB231細胞）、腎がん細胞株(HEK293細胞)を用い検証を行なった。まず、PNPLA6の細胞内における発現について乳がん細胞株である検証を行なった。Immunocytochemistryを行った結果、PNPLA6の細胞内での発現は、小胞体であることが分かった。次に、細胞から、小胞体とミトコンドリアを分画しウェスタンブロットでPNPLA6の発現を検証した結果では、PNPLA6の発現は主にミトコンドリアであることがわかった。以上の結果よりPNPLA6の発現は主にMitochondria associated membrane(MAM)に発現している可能性が高いことが分かった。次に、PNPLA6を欠損させた細胞株を作成した。HEK293細胞、MDA-MB231細胞で、non targetとPNPLA6 ノックアウト細胞の細胞増殖をWST-1 assayにより検証を行なった。HEK293、MDA-MB231細胞両者で、著しい細胞増殖の低下が認められた。そこでHEK293細胞を用い細胞周期をDouble Thymidine Blockを用いG1/S期に同調させさらに検証を行なった。その結果、ノックアウト細胞ではS期に入る時点で細胞周期が遅れていることが分かった。HEK293細胞のnon targetとPNPLA6ノックアウト細胞を用い細胞内のコリン、グリセロホスホコリン（GPC）の産生量を検証したところ、ノックアウト細胞では、著しいコリン、GPCの低下が認められた。このことから、HEK293細胞の細胞内のコリン、GPCの産生はPNPLA6により調節されている可能性が示唆された。

This year, we demonstrated the high level of lipid decomposing enzyme PNPLA 6 in lung cancer cell lines (A549, H157 cells), breast cancer cell lines (MDA-MB 231 cells) and kidney cancer cell lines (HEK 293 cells). The cell lines of PNPLA 6 and PNPLA 6 were isolated and tested. Immunocytochemistry results, PNPLA 6 intracellular development, small cell body development The detection of PNPLA 6 in cells and small cells was carried out. The results showed that PNPLA 6 was found in cells and small cells. The above results indicate that the probability of PNPLA 6 discovery is high due to Mitochondria associated membrane (MAM) discovery. In addition, PNPLA 6 cells were produced without damage. HEK 293 cells, MDA-MB 231 cells, non target, cell proliferation of PNPLA 6 cells, WST-1 assay HEK293 and MDA-MB231 cells were found to have low cell proliferation. HEK 293 cells are used for cell cycle identification in the G1/S phase. As a result, the cell cycle is divided into S phase and S phase. HEK293 cells non target PNPLA 6 cells in the use of intracellular GPC production quantity test The possibility of regulation of GPC production in HEK293 cells by PNPLA6 was discussed.