感染微生物の排除過程における肺コレクチンの新規生理作用の解明

肺サーファクタントに含まれる生体防御タンパク質である肺コレクチンは、呼吸器の生体防御において重要な役割を果たしている。これまでの研究過程において、肺コレクチンの一つであるSP-Dが、これまでに報告されていない酵素活性を示す可能性を見出した。今年度はこの活性が夾雑タンパク質ではなくSP-Dそのものの活性であることを明確に示すための解析を行なった。また同時に、着目している活性の特性も解析した。はじめに、使用しているSP-D試料にどの程度の夾雑タンパク質が含まれているのかを質量分析で確認した。数種類の夾雑タンパク質が含まれることが明らかになったが、本研究で注目している酵素活性を示すようなタンパク質は検出されなかった。ただし、量的に同定に至らなかった夾雑タンパク質が存在する可能性は否定できないため、さらなる解析が必要である。次に、イオン交換やゲルろ過クロマトグラフィーを用いたフラクションアッセイを試みた。クロマトグラフィー後に酵素活性が検出限度ちかくまで減少してしまい、明確な結果が得られなかったが、SP-Dを含む画分にもわずかな活性はみられた。本年度中に明確な結果が得られなかったため、次年度以降も解析を継続する。一方、酵素活性の特性解析では、最適なpH条件、基質の特異性、より適した緩衝液の組成などを決定することができた。これらの情報を基に活性測定系を最適化できたので、次年度以降は解析をより速く進行できると考えている。

肺サーファクタントに含まれる生体防御タンパク質である肺コレクチンは、呼吸器の生体防御において重要な役割を果たしている。これまでの研究過程において、肺コレクチンの一つであるSP-Dが、これまでに報告されていない酵素活性を示す可能性を見出した。今年度はこの活性が夾雑タンパク質ではなくSP-Dそのものの活性であることを明確に示すための解析を行なった。また同時に、着目している活性の特性も解析した。はじめに、使用しているSP-D試料にどの程度の夾雑タンパク質が含まれているのかを質量分析で確認した。数種類の夾雑タンパク質が含まれることが明らかになったが、本研究で注目している酵素活性を示すようなタンパク質は検出されなかった。ただし、量的に同定に至らなかった夾雑タンパク質が存在する可能性は否定できないため、さらなる解析が必要である。次に、イオン交換やゲルろ過クロマトグラフィーを用いたフラクションアッセイを試みた。クロマトグラフィー後に酵素活性が検出限度ちかくまで減少してしまい、明確な結果が得られなかったが、SP-Dを含む画分にもわずかな活性はみられた。本年度中に明確な結果が得られなかったため、次年度以降も解析を継続する。一方、酵素活性の特性解析では、最適なpH条件、基質の特異性、より適した緩衝液の組成などを決定することができた。これらの情報を基に活性測定系を最適化できたので、次年度以降は解析をより速く進行できると考えている。