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ケラチン遺伝子変異の違いによる単純型表皮水疱症の病態への影響と個別化医療の開発

角蛋白基因突变差异对单纯性大疱性表皮松解症病理的影响及个性化医疗的发展

基本信息

批准号：
22K08398
负责人：
岸部麻里
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08398/
关键词：
表皮水疱症ケラチン線維細胞骨格ミトコンドリア個別化医療

项目摘要

表皮水疱症（EBS)でみられるケラチン（K）14変異の違いが、表皮細胞の恒常性に異なった影響を与えるとの仮説を立てた。そこで、K14野生型（WT）とEBSでみられる2つの変異（R125C、G364RFr*118）をドキシサイクリン（Dox）誘導性に発現するHaCaT細胞株を作成し、この3つの細胞株を用いて、細胞質内の変異K14異常凝集が細胞骨格構造に与える影響について比較検討を行った。蛍光染色で観察したところ、K14細胞質内凝集体の割合は、WT8.3±5.5％、R125C 38.0±16.6％、G364RFr*118 77.3±6.3％であり、G364RFr*118で有意に最も高度であることが分かった（P＜0.001)。また、K14とペアを形成するK5の凝集も高度であった。さらに、K14異常凝集体によって、β-チュブリンの分布に偏りを生じており、K14が結合するデスモソーム構成蛋白デスモグレインの発現が弱く、分布に異常を生じることが分かった。以上から、K14 G364RFr*118は、K14異常凝集体を形成することによって、ホットスポット変異R125Cよりも高度な細胞骨格の脆弱性を引き起こす可能性があると考えた。ミトコンドリアは細胞質内に存在する細胞質内小器官で、エネルギー生成やアポトーシスに関与する。表皮ケラチノサイトにおいて、ミトコンドリアはK14およびチュブリンを足場に細胞質内を移動し機能することが報告されている。そこで、K14変異の違いが、ミトコンドリアの分布に異なった影響を及ぼすかミトコンドリア染色行い、比較検討した。その結果、ミトコンドリアはWTでは核周囲に有意に分布するが、R125C、G364RFr*118では核周囲の分布が損なわれ、細胞質辺縁で分布が増加することが確認された。K14変異はミトコンドリアの細胞質内の局在に影響することが分かった。

Epidermal blister syndrome (EBS) is characterized by 14 different patterns, and the effects of epidermal cell homeostasis are different. Therefore, the HaCaT cell line was established and the three cell lines were used, and the effects of K14 wild-type (WT) and EBS on the structure of the cell skeleton due to the 2 changes (R125C, G364RFr*118) induced by Dox were compared. K14, WT 8.3 ±5.5%, R125C 38.0±16.6%, G364RFr*118 77.3±6.3%, G364 RFr * 118 77.3±6.3%. K14 and K5 are highly aggregated. K14 abnormal aggregates, β-cAMP and β-cAMP are distributed in different ways. K14 abnormal aggregates, β-cAMP and β-cAMP bind to each other and constitute protein components. K14 G364RFr*118 and K14 abnormal aggregates were formed, and the possibility of high cellular bone vulnerability was investigated. The existence of cytoplasmic small organs in the cytoplasm of the cell is related to the production of various types of cells. The epidermis is covered with a thin layer of paper, and the surface of the paper is covered with a thin layer of paper. K14, K14, K1 The results showed that R125C and G364RFr*118 had a negative distribution in the cytoplasm and a negative distribution in the cytoplasm. K14 is different from the original, and the cytoplasm is affected by it.