in vivoエストロゲン非依存性乳癌細胞株による内分泌療法抵抗性機序の解析研究

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研究計画調書で示した通り、エストロゲン非依存性の乳癌細胞株(in vivo-estrogen-independent breast cancer celllines: iEIBCCs)を複数樹立した。それぞれの細胞株に対して免疫染色、WB (Western blotting)を行った。その結果ER (Estrogen Receptor)の発現や他の増殖シグナルの活性化については親株より発現が上昇しているものや同等のもの、低下しているものなど多様であり、各々異なるエストロゲン非依存性メカニズムを獲得していると考えられた。今回、我々は乳癌のエストロゲン依存性メカニズムの探索を目的としたiEIBCCsのRNA seqを施行し、それぞれの細胞株の増殖シグナル等を網羅的に解析した。RNA seqは親株、iEIBCCs　4種類、合わせて5種類の細胞株を用いtriplicateした。RNA seqの結果の主成分分析により評価を行ったところ、各celllinesの発現パターンの類似性から信頼度の高い解析結果であることが確認された。さらに、4種類のiEIBCCは全て親株と異なる性質を持ち、iEIBCCsもそれぞれ異なる遺伝子発現パターンを示し、これらは異なるER非依存性メカニズムを有していることを見出した。例えば、ERをコードする遺伝子のESR1の発現に着目したところ、親株と比較しESR1の発現が高度に失われた細胞株、中等度に失われた細胞株、発現が同等の細胞株、親株と比してESR1の発現を強く認めるものと多様であった。また、増殖シグナルの一つであるHER familyをコードする遺伝子 (ERBB2, ERBB3, ERBB4)についても同様であった。これらはWBにより、タンパク発現と相関することを確認している。