共有結合DNAアプタマーと増殖型レトロウイルスを応用した膵癌免疫療法の開発

使用共价 DNA 适体和繁殖逆转录病毒开发胰腺癌免疫疗法

• 批准号: 22K08837
• 负责人: 平野 聡
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08837/
• 关键词: 膵癌; ICI; DNAアプタマー

膵癌は腫瘍免疫活性が低く、免疫チェックポイント阻害剤(ICI)の効果が乏しい現状であるが、共有結合DNAアプタマーを応用したICI(Immune checkpoint inhibit covalently-binding aptamers:ICIA)を開発し効果を検証する目的で研究を開始した。DNAアプタマーは生体内でDNAseの影響で速やかに分解されるため、効果が不安定という欠点がある。そこで共有結合を付加し安定したDNAアプタマーの作成の予備実験を施行した。Tabuchiらの論文（Chem. Commun.,2021,57,2483-86）を参考にthrombinに対するaptamer(thrombin binding aptamer:TBA) を共有結合化したアプタマーをコントロールとし、PD-L1に対する共有結合アプタマーを複数作成した。PD-L1に対するアプタマーの塩基配列は複数報告があるが、塩基数が比較的少なく複数検証された、aptPD-L1(Molecular Therapy-Nucleic Acids20165,e397)を選択し、16番目、20番目、45番目のT残基にwarheadを導入した共有結合型アプタマーを作成した。SDS-PAGEで観察すると、コントロールのTBAはthrombinとの結合が確認されたが、PD-L1とcovalent aptamer(T16,T20,T45,3riplet)の４種類はいずれも結合を確認できなかった。Native-PAGやSELEX bufferを用いたり、bufferの種類や条件設定を複数施行したが、いずれも結合を確認できなかった。そこで、癌細胞の増殖因子VEGF165に対する共有結合アプタマーを作成し実験系がワークしているかを検証した。結果、VEGF165共有結合アプタマー（T4,T17,T22）は３種ともVEGFとの結合が確認された。

The present study on the effect of ICI(Immune checkpoint inhibitor covalently-binding aptamers) on tumor immune activity and immune response began. The DNA in the body is rapidly decomposed and the results are unstable. The preparation of DNA for binding to a DNA molecule Tabuchi's paper (Chem. Commun., 2021, 57, 2483 -86) Reference Thrombin Binding Aptamer(Thrombin Binding Aptamer:TBA) PD-L1 is the most common type of nucleotide sequence that can be used in Molecular therapy-Nucleic Acids (e397). SDS-PAGE was used to detect the binding of TBA and thrombin to PD-L1 covalent aptamers (T16,T20,T45,3riplet). Native-PAG SELEX buffer is used in combination with the buffer type and condition setting. The expression of VEGF-165 in human breast cancer cells was detected by PCR. The results showed that VEGF165 had a total of 3 binding sites (T4,T17,T22).