共有結合DNAアプタマーと増殖型レトロウイルスを応用した膵癌免疫療法の開発

使用共价 DNA 适体和繁殖逆转录病毒开发胰腺癌免疫疗法

• 批准号: 22K08837
• 负责人: 平野 聡
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08837/
• 关键词: 膵癌; ICI; DNAアプタマー

膵癌は腫瘍免疫活性が低く、免疫チェックポイント阻害剤(ICI)の効果が乏しい現状であるが、共有結合DNAアプタマーを応用したICI(Immune checkpoint inhibit covalently-binding aptamers:ICIA)を開発し効果を検証する目的で研究を開始した。DNAアプタマーは生体内でDNAseの影響で速やかに分解されるため、効果が不安定という欠点がある。そこで共有結合を付加し安定したDNAアプタマーの作成の予備実験を施行した。Tabuchiらの論文（Chem. Commun.,2021,57,2483-86）を参考にthrombinに対するaptamer(thrombin binding aptamer:TBA) を共有結合化したアプタマーをコントロールとし、PD-L1に対する共有結合アプタマーを複数作成した。PD-L1に対するアプタマーの塩基配列は複数報告があるが、塩基数が比較的少なく複数検証された、aptPD-L1(Molecular Therapy-Nucleic Acids20165,e397)を選択し、16番目、20番目、45番目のT残基にwarheadを導入した共有結合型アプタマーを作成した。SDS-PAGEで観察すると、コントロールのTBAはthrombinとの結合が確認されたが、PD-L1とcovalent aptamer(T16,T20,T45,3riplet)の４種類はいずれも結合を確認できなかった。Native-PAGやSELEX bufferを用いたり、bufferの種類や条件設定を複数施行したが、いずれも結合を確認できなかった。そこで、癌細胞の増殖因子VEGF165に対する共有結合アプタマーを作成し実験系がワークしているかを検証した。結果、VEGF165共有結合アプタマー（T4,T17,T22）は３種ともVEGFとの結合が確認された。

は Cui cancer is swollen sores が low く Immune activity, Immune チ ェ ッ ク ポ イ ン ト resistance against tonic (ICI) の unseen fruit が spent し い status quo で あ る が, there are combined with DNA ア プ タ マ ー を 応 with し た ICI (Immune checkpoint inhibit covalently binding aptamers:ICIA)を developed effective results を検 evidence する objective で research を began た た. DNA ア プ タ マ ー は born in vivo で DNAse の influence で speed や か に decomposition さ れ る た め, unseen fruit が unrest と い う points less が あ る. Youdaoplaceholder0 そ で で a combination of を diazepam <s:1> たDNAアプタ <s:1> <s:1> <s:1> is prepared for trial を implementation た. Tabuchiら に paper (Chem. Commun.,2021,57,2483-86) を reference にthrombinに vs. するaptamer(thrombin binding aptamer:TBA) を has combined with the し た ア プ タ マ ー を コ ン ト ロ ー ル と し, PD - L1 に す seaborne る mutual combination ア プ タ マ ー を plural made し た. PD-L1に reports <s:1> complex numbers of するアプタ <s:1> base coordination があるが, fewer なく complex numbers of 検 evidence された of が base comparison, aptPD-L1(Molecular Therapy-Nucleic In Acids20165,e397)を, select 択 た, 16th, 20th, and 45th batch <s:1> T residues にwarheadを and import them into the <s:1> た common binding type アプタ アプタ を を を を を を to create た. Sds-page で す was 観 る と, コ ン ト ロ ー ル の associates は thrombin と の combining が confirm さ れ た が, PD - L1 と covalent aptamer (T16, T20 T45, 3 riplet) の 4 kinds は い ず れ も combining を confirm で き な か っ た. Native - PAG や SELEX buffer を with い た り, buffer の kinds execute し や conditions set を plural た が, い ず れ も combining を confirm で き な か っ た. そ こ で, cancer cells の raised colonization factor VEGF165 に す seaborne る mutual combination ア プ タ マ ー を made し be 験 department が ワ ー ク し て い る か を 検 card し た. Results, as well as the combination of VEGF165 mutual ア プ タ マ ー (T4, T17, T22) three と は も VEGF と の combining が confirm さ れ た.