再生医療における他家積層線維芽細胞シートの新たな緩慢凍結保存法の開発

再生医学中同种异体层压成纤维细胞片缓慢冷冻保存新方法的开发

• 批准号: 22K08937
• 负责人: 白澤 文吾
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08937/
• 关键词: 細胞シート移植; 再生医療; 細胞シート

本年度は、マウス尾からの単離した線維芽細胞シートの樹立およびその線維芽細胞シートの凍結保存の検討を行った。C57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの尾から線維芽細胞を単離し、線維芽細胞シートを作製した。線維芽細胞シートを凍結保存する細胞保存液を検討するために、DMSOを含有している細胞保存液、DMSOを含有していない細胞保存液を使用して、線維芽細胞シートを3Dフリーザーで凍結後に、-80℃で保存し、その後、解凍して培養した時の細胞生存率を細胞代謝試薬で評価した。コントロールとして、非凍結の線維芽細胞シートの細胞生存率を100%としたところ、DMSOを含有している細胞保存液で凍結したC57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの線維芽細胞シートの細胞生存率は約80%前後であったが、DMSOを含有していない細胞保存液で凍結したC57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの線維芽細胞シートの細胞生存率は約25-60%前後であったことから、本研究では、細胞保存液はDMSO含有を使用することにした。非凍結線維芽細胞シートおよび3Dフリーザーで凍結保存した線維芽細胞シートを解凍して培養した時に、線維芽細胞シートが分泌する成長因子をELISAで解析したところ、非凍結線維芽細胞シートの分泌能を100%とすると、凍結保存した線維芽細胞シートのVEGF、HGF、SDF-1の分泌能は、約60-80%であった。

This year は, マ ウ ス tail か ら の 単 from し た line d bud cells シ ー ト の set お よ び そ の line d bud cells シ ー ト の freezing preservation の 検 line for を っ た. C57BL / 6 マ ウ ス お よ び C3H/HE マ ウ ス の tail か ら line d を bud cells from し 単, line d bud cells シ ー ト を cropping し た. Line d bud cells シ ー ト を freezing preservation す る cell preservation solution を beg す 検 る た め に, DMSO を contains し て い る を contain cell preservation solution, DMSO し て い な い cell preservation solution を use し て, line d bud cells シ ー ト を 3 d フ リ ー ザ ー で に, - 80 ℃ after freeze で preservation し, そ の, thaw し て cultivate し た を の cell survival Cell metabolic drug で review 価 た た. コ ン ト ロ ー ル と し て, non freezing の line d bud cells シ ー ト の cell survival rate 100% を と し た と こ ろ, DMSO を contains し て い る cell preservation solution で freeze し た C57BL / 6 マ ウ ス お よ び C3H/HE マ ウ ス の line d bud cells シ ー ト の cell survival は about 80% before and after で あ っ た が, DMSO を contains し て い な い cell preservation solution で freeze し た C57BL / 6 マ ウ ス お よ び C3H/HE マ ウ ス の line d bud cells シ ー ト の cell survival は before and after about 25-60% で あ っ た こ と か ら, this study で は, cell preservation solution containing を using は DMSO す る こ と に し た. The frozen line d bud cells シ ー ト お よ び 3 d フ リ ー ザ ー で freezing preservation し た line d bud cells シ ー ト を thaw し て cultivate し た に, line d bud cells シ ー ト が secretion す る growth factor を ELISA で parsing し た と こ ろ, the frozen line d bud cells シ ー ト の can secrete を 100% と す る と, freezing preservation し た line d bud cells シ ー ト の The secretion energy of VEGF, HGF and SDF-1 is であった, approximately 60-80%であった.

项目成果

3Dフリーザーによる細胞シート凍結の可能性

使用 3D 冷冻机冷冻细胞片的可能性

• 发表时间: 2022
• 作者: 鈴木亮;上野耕司;池創一;山本直宗;松野祐太朗;藏澄宏之;桂春作;白澤文吾;濱野公一
• 通讯作者: 濱野公一

Cryopreserved allogenic fibroblast sheets: development of a promising treatment for refractory skin ulcers.

• 发表时间: 2022
• 期刊: American journal of translational research
• 影响因子: 2.2
• 作者: Soichi Ike;Koji Ueno;Masashi Yanagihara;T. Mizoguchi;Takasuke Harada;K. Suehiro;H. Kurazumi;R. Suzuki;T. Kondo;Tomoaki Murata;B. Shirasawa;N. Morikage;K. Hamano