ダイノルフィンとD-セリンの脊髄疼痛伝達における相互作用に関する研究

神経障害性疼痛、炎症性疼痛などの慢性疼痛時の脊髄においてダイノルフィンA (Dyn)量が増加することが知られている。しかし、脊髄内Dyn量増加による慢性疼痛発症メカニズムは不明である。これまでに申請者らは、(1)高用量Dynをラット脊髄内投与すると疼痛を示すこと、(2)Dyn代謝物を脊髄内投与して生じる疼痛はintactなDynと比べて弱いこと、(3)Dynをラット髄腔内に投与して生じる疼痛はNMDA受容体グリシン結合部位アンタゴニストにより拮抗されること、(4)D-セリン髄腔内投与により疼痛を示すこと、などを明らかにした。D-セリンはNMDA受容体グリシン結合部位の内在性リガンドとしてNMDA受容体活性を調節する。マイクロダイアリシス法により脊髄後角における細胞外液をを回収し、Dyn、Dyn代謝物の定量法について検討した。すなわち、これまでの先行研究ではDynの定量は抗Dyn抗体を用いたELISA法が用いられてきた。しかし、脊髄内マイクロダイアリシス法によるDyn、Dyn代謝物のダイナミックな変動をリアルタイムで解析する方法としては本方法は適していない。そこで、Dynなどのオピオイドペプチドを極めて高感度な電気化学検出器とHPLC法を組み合わせた新たな検出法の検討を行った。その結果、ダイアモンド電極を用いた電気化学検出器でメチオニンエンケファリンを定量分析することが可能となった。この手法を用いて、脊髄内メチオニンエンケファリンの検出が可能であることが明らかとなった。

神経障害性疼痛、炎症性疼痛などの慢性疼痛時の脊髄においてダイノルフィンA (Dyn)量が増加することが知られている。しかし、脊髄内Dyn量増加による慢性疼痛発症メカニズムは不明である。これまでに申請者らは、(1)高用量Dynをラット脊髄内投与すると疼痛を示すこと、(2)Dyn代謝物を脊髄内投与して生じる疼痛はintactなDynと比べて弱いこと、(3)Dynをラット髄腔内に投与して生じる疼痛はNMDA受容体グリシン結合部位アンタゴニストにより拮抗されること、(4)D-セリン髄腔内投与により疼痛を示すこと、などを明らかにした。D-セリンはNMDA受容体グリシン結合部位の内在性リガンドとしてNMDA受容体活性を調節する。マイクロダイアリシス法により脊髄後角における細胞外液をを回収し、Dyn、Dyn代謝物の定量法について検討した。すなわち、これまでの先行研究ではDynの定量は抗Dyn抗体を用いたELISA法が用いられてきた。しかし、脊髄内マイクロダイアリシス法によるDyn、Dyn代謝物のダイナミックな変動をリアルタイムで解析する方法としては本方法は適していない。そこで、Dynなどのオピオイドペプチドを極めて高感度な電気化学検出器とHPLC法を組み合わせた新たな検出法の検討を行った。その結果、ダイアモンド電極を用いた電気化学検出器でメチオニンエンケファリンを定量分析することが可能となった。この手法を用いて、脊髄内メチオニンエンケファリンの検出が可能であることが明らかとなった。