脳脊髄液循環路（経路と組織構造）の解明とその経路の臨床への応用

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1) 頭蓋外への脳脊髄液排出路の可視化とその組織同定a. 胎盤につながれた状態の胎児マウス（胎生13日）脳室に金コロイドを注入し、一定時間の後に取り出し固定。その後、標本を銀染色、透明化するとことで胎児全身において集積した金粒子を可視化している。これまでの研究で、脳室への注入手技、透明化、銀染色手技は確立した。脳室壁、頭蓋底、脊柱管に金粒子の集簇がおこることがわかった。また、蛍光色素注入標本の解析において、脳室内脈絡叢、視神経周囲も脳脊髄液排出路の候補となることが判明した。今回は、この部分に特に注意して解析中である。b. 共焦点3D顕微鏡下にCadaverineが通過したtractを解析：胎盤につながれた状態の胎児マウス（胎生13日）脳室にCadaverineを注入し、一定時間の後に取り出し固定した。前頭蓋底のtract描出に成功した。2) 蛍光色素法による脳脊髄液排出路の可視化とその組織の同定：脳脊髄液排出路として可能性が高い前頭蓋底から鼻腔でCadaverine, LYVE-1, CD51の二重染色を行っている。LYVE-1は鼻腔粘膜には染まる部位があるが前頭蓋底から鼻腔につながるところでは染色なし。Cadaverine染色部位とCD51染色部位は一致しないことを確認した。3) 電子顕微鏡による脳脊髄液流出路の構造解析：胎盤につながれた状態の胎児マウス（胎生13日）脳室に金コロイドを注入し、一定時間の後に取り出し固定。電子顕微鏡で、脳脊髄液排出路として可能性が高い前頭蓋底、脈絡叢における金粒子沈着を解析中である。