Development of innovative treatments using next-generation exosomes for cerebral infarction

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①実験的脳梗塞モデルに対する骨髄間葉系幹細胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ：ＭＳＣ）の経静脈的投与による治療効果②神経栄養因子を含む種々のタンパク質が内包されているＭＳＣ由来エクソソーム（ＭＳＣｅｘｏ）の経静脈投与による神経損傷に対する治療効果が報告されている。本研究では、神経損傷に対するさらなる治療効果を得るために，神経栄養因子高発現を起こす遺伝子改変ＭＳＣ由来エクソソーム（遺伝子改変ＭＳＣｅｘｏ）などを用いて、実験的脳梗塞モデルに対する治療効果を検証する。さらには、ＭＳＣ併用下でのＭＳＣｅｘｏ、遺伝子改変ＭＳＣｅｘｏ療法の治療効果を検証する。解析方法は生化学的解析（ＥＬＩＳＡなど）、行動学的解析（トレッドミルなど）、ＭＲＩ解析（DTIによる神経線維数の変化など）を用いて、以下の方法を予定している。方法１：種々のＭＳＣｅｘｏによる治療効果の比較解析、方法２：ＭＳＣ治療との併用下におけるＭＳＣｅｘｏの効果の比較解析、方法３：種々のＭＳＣｅｘｏの網羅的ｍｉＲＮＡ解析、プロテオーム解析本年の研究成果に関して、①実験的動物モデルの作成、②治療に十分な量のエクソソームを確実に回収するためのプロトコールの確立（十分量を確保するための細胞数の検証、超遠心時間の再調整）、③回収したエクソソームの確認（エクソソーム溶液内に含有されるタンパク質量の測定、MSC由来エクソソームのマーカーの確認、電子顕微鏡での肉眼的確認）を実施した。