塩基性ヘリックスループヘリックス転写機構制御と細胞治療を融合する神経再生治療開発

①　bHLH神経転写因子の遺伝子導入、 in vitroでの神経栄養因子の測定：アフリカツメガエル幼生期に高発現している脊髄再生に関わるNeurod4（bHLH神経転写因子）をシュードウイルスベクターでSHED（ヒト由来歯髄幹細胞）に良好に遺伝子導入し(Neurod4-SHED)、ウエスタンブロットでNeurod4が発現されていることが確認できた。その後、in vitroで培養し、神経栄養因子の分泌（培養上清での測定）を測定し、Neurod4-SHEDをnaiveのSHEDと比較した結果、MCP-1、TGF-βが有意に上昇していることがつきとめられた。これらが炎症惹起するM1マクロファージより炎症抑制するM2マクロファージを活性化する機能を有するため、マクロファージの動態を解析することを現在行っている。②　ラットへのSHED投与、機能評価、組織学的解析：胸髄損傷ラットモデルを用い、SHEDを胸髄内に投与した。下肢運動機能スコア（BBBスコア）で良好な下肢の運動機能回復がnaiveのSHEDとの比較で有意差をもって確認された。③　Neurod4-SHEDの造腫瘍性試験：Neurod4-SHEDを移植して8週間の時点では、ラットの健康状態には問題がなく、造腫瘍性も否定されている。

①　bHLH神経転写因子の遺伝子導入、 in vitroでの神経栄養因子の測定：アフリカツメガエル幼生期に高発現している脊髄再生に関わるNeurod4（bHLH神経転写因子）をシュードウイルスベクターでSHED（ヒト由来歯髄幹細胞）に良好に遺伝子導入し(Neurod4-SHED)、ウエスタンブロットでNeurod4が発現されていることが確認できた。その後、in vitroで培養し、神経栄養因子の分泌（培養上清での測定）を測定し、Neurod4-SHEDをnaiveのSHEDと比較した結果、MCP-1、TGF-βが有意に上昇していることがつきとめられた。これらが炎症惹起するM1マクロファージより炎症抑制するM2マクロファージを活性化する機能を有するため、マクロファージの動態を解析することを現在行っている。②　ラットへのSHED投与、機能評価、組織学的解析：胸髄損傷ラットモデルを用い、SHEDを胸髄内に投与した。下肢運動機能スコア（BBBスコア）で良好な下肢の運動機能回復がnaiveのSHEDとの比較で有意差をもって確認された。③　Neurod4-SHEDの造腫瘍性試験：Neurod4-SHEDを移植して8週間の時点では、ラットの健康状態には問題がなく、造腫瘍性も否定されている。