悪性神経膠腫におけるテモゾロミド耐性獲得においてオートファジーが果たす役割の解明

阐明自噬在恶性胶质瘤获得替莫唑胺耐药中的作用

• 批准号: 22K09290
• 负责人: 米澤 大
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09290/
• 关键词: グリオーマ; オートファジー; テモゾロミド; 耐性機序

U251をtemozolomide (TMZ) 含有培地で培養し、限界希釈法にて単離したTMZ耐性株を樹立し、研究に用いた。U251および U251由来TMZ耐性株 (U251/TMZ-R) それぞれをTMZ含有培地で培養の後、autophagyの指標である、isoform B of microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ (LC3B-Ⅱ)、caspase-3をwestern blottingにて検出し、比較した。また、TMZ暴露後のLC3Bの凝集を蛍光顕微鏡にて観察した。さらに、autophagosomeとlysosomeの融合阻害剤であるbafilomycin A1 (BA) をTMZと併用時での検討を行った。細胞生存率の評価にはMTT assayを用いた。LC3B-Ⅱの増加およびLC3Bの凝集は、U251/TMZ-RではU251に比べ抑制されていた。cleaved caspase-3の出現は、U251でのLC3B-Ⅱの増加の後に観察されたが、U251/TMZ-Rでは観察されなかった。BA併用下では、U251/TMZ-RにおいてもTMZによるLC3B-Ⅱ増加は、U251と同様に誘導され、cleaved caspase-3の出現および生存率の低下が観察された。

U251 temozolomide (TMZ) contains culture medium, limit culture medium, isolation medium, TMZ resistant plant, and research medium. U251 and U251 were derived from TMZ resistant strain (U251/TMZ-R). After TMZ was cultured, autophagy index, isoform B of microtubule-associated protein light chain 3-II (LC3B-II), caspase-3 and western blotting were detected and compared. The aggregation of LC3B after TMZ exposure was observed by optical microscopy. The fusion inhibitors of autophagosome and lysosome are discussed when bafilomycin A1 (BA) and TMZ are used together. Cell viability evaluation is performed using MTT assay. LC3B-Ⅱ increases and LC3B aggregates, U251/TMZ-R decreases and U251 decreases. The presence of cleaved caspase-3 and the increase of LC3B-Ⅱ in U251 and U251/TMZ-R were observed. BA and U251/TMZ-R increased LC3B-Ⅱ, U251 induced caspase-3 and decreased survival rate.