Therapeutic value of mesenchymal stromal cells on motility disturbance and neuropathic pain associated with cervical compressive myelopathy.

间充质基质细胞对颈椎压迫性脊髓病相关运动障碍和神经性疼痛的治疗价值。

• 批准号: 22K09397
• 负责人: 竹浦 直人
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09397/
• 关键词: 圧迫性頚髄症; 骨髄由来間葉系間質細胞（BMSC）; 自然発症圧迫性頚髄症モデル（ttw/ttw）; 圧迫性頸髄症; 骨髄由来間葉系間質細胞; 慢性疼痛; 神経障害性疼痛; ttw/ttwマウス

本研究課題の核心をなす学術的「問い」として、「圧迫性頚髄症に対して骨髄由来間葉系間質細胞を投与することによって、運動機能改善や疼痛改善が得られるのではないか」という点を挙げ、自然発症圧迫性頚髄症モデル（ttw/ttw）マウスの脊髄圧迫やtip-toe walkingが現われる時期にBMSCを投与し、それによる運動機能改善・疼痛改善効果について組織学的検討を含めて調査している。1. BMSC 投与による圧迫脊髄の組織学的変化・神経保護効果・疼痛関連物質発現変化・液性因子発現変化を検証。2. BMSC 投与が運動機能・疼痛閾値に与える影響の解析。本年度の研究成果として、キメラマウスの作成およびBMSC移植を行った。12週齢ttwマウスに9Gyの放射線を照射後、CAG-EFGP transgenicマウス骨髄細胞を尾静脈し、GFP陽性骨髄細胞移植キメラマウスを作成した。更に、ICRマウス大腿骨からBMSCを分離・継代し、PKH26で蛍光標識したBMSCを16週齢および20週齢のttwマウスに尾静注した。(1)組織学的検討：16,20週齢ttwマウスにBMSCを尾静注し、それぞれの頚髄を摘出し、LFB染色を行い白質における脱髄変化を調べた。(2)再生軸索・錐体路の評価：上記(1)と同時期に、1次抗体にNF-H, GAP-43, PKC-γを用いた再生軸索および再生錐体路の評価を行った。(3)残存脊髄神経細胞の評価：上記(1)と同時期に、Nissl染色を行い、残存前角細胞を評価した。apoptosisの評価として、TUNEL染色とNeuN, RIPの蛍光二重染色および一次抗体に activecaspase-3, caspase-8を用いた免疫染色・イムノブロットを行った。(4)運動機能評価：上記(1)と同時期に、BMS(Basso Nouse Score)による運動機能評価を行った。

The core of this research topic is the academic "question" and "stress disorder related to bone mesenchymal stem cell injection, motor function improvement and pain improvement". The point is that natural stress disorder related to bone mesenchymal stem cell injection (ttw/ttw), spinal pressure tip-toe walking related to bone mesenchymal stem cell injection, BMSC injection and BMSC injection. Results of motor function improvement and pain improvement include histological investigation. 1. Histological changes, neuroprotective effects, development of pain-related substances, and development of fluid factors associated with BMSC 2. Analysis of the effects of BMSC on motor function, pain threshold and pain threshold. This year's research results include: After 12 weeks of radiation exposure, CAG-EFGP transgenic osteoblasts and GFP positive osteoblasts were transplanted into the tail vein. In addition, ICR Thigh BMSC separation, PKH26 light identification, BMSC 16 weeks and 20 weeks (1)Histological evaluation: 16, 20 weeks after injection of BMSC, extraction of BMSC and LFB staining, linear extraction of BMSC and LFB staining. (2)Regenerative axons and pyramidal pathways are evaluated in the following ways: (1) At the same time, the primary antibody is NF-H, GAP-43, PKC-γ. (3)Evaluation of residual spinal neurons: (1) At the same time, Nissl staining was performed, and residual anterior horn cells were evaluated. Evaluation of apoptosis, TUNEL staining, NeuN, RIP, double staining, primary antibody, activecaspase-3, caspase-8, and immunostaining. (4)Motor function evaluation: the above note (1) and the same period, BMS(Basso Nouse Score) and the motor function evaluation.