尿中エクソソームのPreeclampsia早期診断バイオマーカー有用性の検討

本研究は、妊娠初期に将来の妊娠高血圧腎症 Preeclampsia(PE)発症を予測できるバイオマーカーを同定することを目的とする。妊婦の尿検体を用いて、細胞外小胞であるエクソソームが伝達するPE関連分子を同定する。2022年4月から12月にかけて、当院においてPEと診断され、分娩誘発を予定された妊婦の分娩前の尿を凍結保存した。重症PE症例（収縮期血圧 160以上または拡張期血圧110以上、蛋白尿、臓器障害（血小板減少、肝機能障害、投薬にて改善しない右季肋部痛、心窩部痛、腎機能障害、肺水腫、新規発症の投薬にて改善しない頭痛、視野障害）を認める）3例と妊娠週数をマッチさせた正常妊娠症例3例の尿からエクソソームを抽出した。Exo Urine EV Isolation Kit（サイズ排除クロマトグラフィー法、System Biosciences, LLC）を用いて尿中エクソソームを分離同定し、エクソソームのマーカーであるCD63, CD81, CD9の発現および胎盤由来マーカーであるPLAPの発現をwestern blot法で確認し、胎盤由来のエクソソームであることの確認を行った。Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)を用いてエクソソームの粒度分布プロファイルと濃度を測定し、エクソソームは30-150nmのサイズにあることを確認した。分離同定したエクソソームにおけるサイトカインなどの発現量の違いをRayBio Label-Based Antibody Array(L-Series)を用いて、網羅的に解析し、PE由来のエクソソームに特異的に発現する分子（PE関連分子）を正常妊娠症例と比較している。

本研究は、妊娠初期に将来の妊娠高血圧腎症 Preeclampsia(PE)発症を予測できるバイオマーカーを同定することを目的とする。妊婦の尿検体を用いて、細胞外小胞であるエクソソームが伝達するPE関連分子を同定する。2022年4月から12月にかけて、当院においてPEと診断され、分娩誘発を予定された妊婦の分娩前の尿を凍結保存した。重症PE症例（収縮期血圧 160以上または拡張期血圧110以上、蛋白尿、臓器障害（血小板減少、肝機能障害、投薬にて改善しない右季肋部痛、心窩部痛、腎機能障害、肺水腫、新規発症の投薬にて改善しない頭痛、視野障害）を認める）3例と妊娠週数をマッチさせた正常妊娠症例3例の尿からエクソソームを抽出した。Exo Urine EV Isolation Kit（サイズ排除クロマトグラフィー法、System Biosciences, LLC）を用いて尿中エクソソームを分離同定し、エクソソームのマーカーであるCD63, CD81, CD9の発現および胎盤由来マーカーであるPLAPの発現をwestern blot法で確認し、胎盤由来のエクソソームであることの確認を行った。Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)を用いてエクソソームの粒度分布プロファイルと濃度を測定し、エクソソームは30-150nmのサイズにあることを確認した。分離同定したエクソソームにおけるサイトカインなどの発現量の違いをRayBio Label-Based Antibody Array(L-Series)を用いて、網羅的に解析し、PE由来のエクソソームに特異的に発現する分子（PE関連分子）を正常妊娠症例と比較している。