ヒトiPS細胞由来気道上皮細胞移植における生着効率向上因子の探索

寻找提高人 iPS 细胞来源的气道上皮细胞移植植入效率的因素

• 批准号: 22K09666
• 负责人: 桑田 文彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09666/
• 关键词: 気管; ヒトiPS細胞; 線毛上皮細胞; トランスクリプトーム; 免疫不全ラット; 気道上皮; 移植; トランスクリプトーム解析

気管は呼気の通り道として重要であり、その管腔面を覆う気道上皮は呼気中の異物を排出する機能を担っているため、障害されると易感染性となり、時として生命にかかわる。申請者らはヒトiPS細胞由来気道上皮細胞移植治療による気管欠損部の早期上皮化を目指し、免疫不全ラットへの移植モデルを確立しているが、生着効率は低く実験ごとのばらつきも大きいため、改善が必要である。本研究では、我々が既に確立しているhiPSC由来気道上皮移植免疫不全ラットにつき一般的な移植条件を再検討することでI.移植効率の高い移植条件を検討し、その移植条件を用いて作製した移植モデルのII.移植部組織を採取し、遺伝子発現解析により、移植細胞生着に関与するホストとレシピエント双方の遺伝子群の選定をおこない、III.解析結果から想定される移植効率向上因子の調節による生着効率向上法の確立を目指す。今年度はヒト由来転写産物が検出されるよう、移植細胞の分化ステージの検討やヒトiPS細胞由来気道上皮細胞シートで被覆した人工気管の移植における術式など移植法の改善を行った上で、移植部位からのRNA抽出を複数回行い、解析に必要な量と品質が保たれるような移植部位のサイズ、組織保管法、回収法などの検討を行った。確定した条件で採取された組織からRNA抽出後、RNAの品質評価を行い、トランスクリプトーム解析を行った。またコントロールとして細胞なしの移植部組織、ヒト由来の移植細胞からもRNA抽出を行い、トランスクリプトーム解析に必要な量の検討を行った。

气管作为呼气的通道很重要，覆盖其管腔表面的气道上皮负责将异物从呼气中排出，因此，如果受损，它会变得感染性，有时会危及生命。申请人已经建立了一个在免疫功能低下的大鼠中植入的模型，目的是早期上皮化，由人IPS细胞衍生的气道上皮细胞移植疗法对气管缺陷进行早期化，但需要改善，因为爆炸效率很低，实验之间的变化很大。在这项研究中，我们回顾了我们已经建立的HIPSC的免疫缺陷大鼠的一般移植条件，并检查了I.具有高移植效率的移植条件，ii。收集了使用移植条件产生的移植模型的移植组织，通过基因表达分析，我们选择了参与移植细胞植入的宿主和受体的基因组，并旨在通过调节因素从III结果中预期的调节因素来提高植入效率。今年，我们研究了移植细胞的分化阶段，以检测人类衍生的转录物，并改善了移植方法，例如手术程序，用于移植人工气管覆盖的人造气管上皮细胞上皮细胞表，然后从移植位点中提取多个时间和质量的分析方法，并将其用于存储的方法，并恢复质量，并恢复该方法，并将其构成质量，该方法的分析方法，并将其用于组织，该方法，组织和组织的质量。从确认条件下收集的组织中提取RNA后，对RNA进行了质量评估，并进行了转录组分析。另外，从无细胞移植组织和人移植细胞作为对照中提取RNA，并检查了转录组分析所需的量。