細胞外小胞を介した口腔扁平上皮癌細胞の悪性化能獲得機構の解明

阐明口腔鳞状细胞癌细胞通过细胞外囊泡获得恶性潜能的机制

• 批准号: 22K09721
• 负责人: 木下 崇
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Chiba Cancer Center (Research Institute)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09721/
• 关键词: 口腔癌; エクソソーム; 血清; シークエンス; microRNA; 細胞外小胞; マイクロRNA; 癌関連線維芽細胞

まずは血清からエクソソームの表面に露出しているホスファチジルセリンに結合するT-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4（Tim4）を固相化したビーズを用いたキット（MagCaptur Exosome Isolation Kit PS）を使ってエクソソームの分離方法の最適化を行った。その結果血清1.5mlからsmall RNAシークエンスに使用するのに十分量のRNA収量が得られたため、引き続いて口腔癌患者の術前血清を用いてエクソソーム中のmicroRNAプロファイリングを行った。術後1年以上経過した症例の中で再発例5例と非再発例4例の血清からMagCapture Exosome Isolation Kit PSを用いてエクソソームの抽出を行った後にRNAを抽出しsmall RNAシークエンスを行った。シークエンスの結果、平均で14.9百万リードが得られ、そのうちmiRNA及びpiRNAにマップされた割合は平均58%であった。得られたシークエンス結果をTMM法にて正規化し、再発群と非再発群の比較を行い、再発群で有意に発現上昇を認めたmiRNAを同定した。これらmicroRNAについてTCGAのデータを用いて、頭頸部癌における予後の相関を検討した。その結果、miR-154およびmiR-763においては発現が高い群が有意に全生存率が低いことが明らかとなった。

Optimization of the separation method for the serum from the T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4 (Tim4) using MagCaptur Exosome Isolation Kit PS. Results Serum 1.5ml small RNA in serum was used to determine the amount of RNA in serum. More than 1 year after surgery, 5 cases of recurrent disease and 4 cases of non-recurrent disease were detected by serum MagCapture Exosome Isolation Kit. The average number of miRNAs and piRNAs obtained was 14.9 million. The average number of miRNAs and piRNAs obtained was 58%. TMM method is used to normalize, reproduce and compare non-reproduce miRNA. TCGA is used for microRNA detection, and head and neck cancer is used for subsequent detection. As a result, miR-154 and miR-763 were found to have high survival rates and low survival rates.