神経伝達物質サブスタンスPによる角膜線維芽細胞のコラーゲン分解調節機構の解明

阐明神经递质P物质调节角膜成纤维细胞胶原蛋白降解的机制

• 批准号: 22K09847
• 负责人: 杉岡 孝二
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09847/
• 关键词: コラーゲン合成能; 角膜線維芽細胞; substance P; TGF-beta; 神経麻痺性角膜症

本研究の目的は、神経麻痺性角膜潰瘍の根底にあるメカニズムを理解するために、神経伝達物質の一つであるsubstance P (SP)が、IL-1などの種々の因子で刺激された角膜線維芽細胞によるuPAの発現やコラーゲン分解にどのような影響を与えるかについて、角膜線維芽細胞をコラーゲンゲル内で3次元的に培養するin vitroモデルを用いて検討することである。令和4年度は、まずはじめにヒト培養角膜線維芽細胞を用い、SP添加による細胞生存率をcell viability assayで検討した。その結果、SPの濃度に依存して、有意に細胞増殖を促進した。次にSP単独、あるいはIL-1, IL-6, TGF-beta, IGF-1の存在下でのSPの有無によるコラーゲン分解能を、fibrin zymographyによるuPAの発現、およびｂヒドロキシプロリン測定による定量化試験で検討した。その結果、すべての群においてSPはuPAの発現およびコラーゲン分解能に影響を与えなかった。この結果により、SPがケラトサイトによるコラーゲン分解能に単独で影響を与えないだけでなく、IL-1, IL-6, TGF-beta, IGF-1の存在下においてもコラーゲン分解に影響を与えないことが明らかになった。そこで、SP単独、あるいはIL-1, IL-6, TGF-beta, IGF-1の存在下でのSPの有無によるコラーゲン合成能を検討した。その結果、SPは単独ではコラーゲン合成に影響を与えなかったが、TGF-betaの存在下でSPはTGF-beta単独に比べ、コラーゲン合成を有意に促進させた。またMMP-1をコラーゲンの分解能の指標に、1型コラーゲンをコラーゲン合成能の指標に設定し、real time PCRにより角膜線維芽細胞のMMP-1および1型コラーゲンの発現を検討したところ、TGF-betaの存在下でSPを加えると、1型コラーゲンのmRNA量は有意に上昇していた。

In this study, the purpose of this study is to investigate the effects of substance P (SP) and IL-1 on the growth of the cornea. In this study, the purpose of this study is to investigate the effects of paroxysmal keratosis, paroxysmal cornea, myopia, keratosis, keratosis, The corneal sprouts were isolated from the cornea, and the three-dimensional in vitro was used in the cornea. In 2004, SP was added to determine the cell survival rate and the survival rate of cell viability assay cells. The results of the experiment, the degree of SP dependence, and the promotion of intentional cell colonization. In the presence of the secondary SP, IL-6, TGF-beta, IGF-1, the SP has the decomposition energy, the fibrin zymography, the uPA, the detection, the measurement, the quantification, the quantification. The results show that the decomposition of SP data has a negative effect on the performance of the group. The effect is different from that of the group. The results show that there is a significant difference between SP and IL-1, IL-6, TGF-beta, and IGF-1 in the presence of decomposition. In the presence of SP, IL-1, IL-6, TGF-beta, IGF-1, SP has the ability to synthesize energy. The results show that the synthesis of SP is more effective than that of TGF-beta in the presence of TGF-beta, and that the synthesis is intended to promote the improvement of performance. In the MMP-1 environment, the decomposition energy of the SP, the synthesis of the mRNA of the type 1, the setting of the setting, the MMP-1 of the cell of the cornea, the temperature of the cell, the presence of the TGF-beta, the presence of the SP and the mRNA of the type 1 were detected.