Zeitaufgelöstes Fluoreszenzimaging zum selektiven Nachweis von NAD(P)H- bzw. FAD-abhängigen Enzymen am Beispiel zellvermittelter Pathogenzerstörung

以细胞介导的病原体破坏为例，用于选择性检测 NAD(P)H 或 FAD 依赖性酶的时间分辨荧光成像

• 批准号: 61560512
• 负责人: Professorin Dr. Raluca Aura Niesner
• 金额: --
• 依托单位: Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin (DRFZ)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2007-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/61560512?language=en
• 关键词: Zeitaufgel; stes; Fluoreszenzimaging; zum; selektiven

Im Rahmen dieses Projektes sollen die Machbarkeit und die Vorteile eines intrazellulären selektiven Enzymnachweises mittels markerfreier zeitaufgelöster fluoreszenzmikroskopischer Methoden (mono- und biexponentielles FLIM und FAIM, d.h. Fluoreszenzlebensdauer bzw. Fluoreszenzanisotropie Imaging) erforscht werden, die die Coenzyme NADH, NAD(P)H und FAD als endogene Signalvermittler benutzen. Hierfür werden Experimente an NADH, NADPH und FAD abhängigen Enzymen sowohl unter extra- als auch unter intrazellulären Bedingungen durchgeführt. Dieses Vorhaben ist von allgemeiner Relevanz für die Biowissenschaften, da der intrazelluläre Enzymnachweis mit einer direkten hoch aufgelösten Erfassung vitaler von den entsprechenden Enzymen katalysierter Prozesse gleichzusetzen ist. Als konkretes Beispiel mit besonderer biowissenschaftlicher Bedeutung wurde die NADPH Oxidase ausgewählt, ein NADPH abhängiges Enzym, das eine zentrale Rolle in der zellvermittelten Pathogenzerstörung sowohl in pflanzlichen (Nicotiana tabacum) als auch in tierischen Zellen (neutrophilen Granulozyten) hat. Mit Hilfe der vorgeschlagenen Methoden (FLIM und FAIM) sollen erstmalig die Kinetik und die Lokalisierung der Aktivierung der NADPH Oxidase intrazellulär aufgeklärt werden. Die Untersuchungen sollen sich nicht nur auf in vitro Experimente beschränken sondern auch in Gewebe und sogar im lebenden Organ durchgeführt werden, wofür die Zweiphotonen-Mikroskopie zum Einsatz kommt. Ein Vergleich der Aktivierung der NADPH Oxidase in pflanzlichen Zellen gegenüber tierischen Zellen ist abschließend geplant.

Im Rahman Dieses Projektes Sollen die Machbarkeit and die Vorteile eines inzellulren selektiven Enzymnachweise Mittels markerfreer zeitaufelöster荧reszenzmikroskopischer Methoden(mono-and biexpentielle flim and faim，D.H.荧光各向异性成像)错误，辅酶NADH，NAD(P)H和FAD ALS内源信号。NADH、NADPH和FAD ABHängien Enzymen sowohl在细胞内注射NADH，NADPH和FAD ABHängien Enzymen Sowohl in zellellulren Bedingungen duchgeführt.这是一个非常重要的问题，因为这是一个非常重要的问题，因为这是一个非常重要的问题。据了解，烟草中的NADPH氧化酶是一种新的酶，在烟草病原菌中的中心位置，在烟草中也存在。麻省理工学院的方法论(Flim And Fim)是一种新的方法和方法，但在NADPH氧化酶的作用下，它并不是唯一的方法。在Gewebe和Sogar im lebenden器官中进行体外实验，WOFür die ZweiPhoonen-Mikroskopie zum einatz kommt.NADPH氧化物酶在地衣生产中的应用。