Zeitaufgelöstes Fluoreszenzimaging zum selektiven Nachweis von NAD(P)H- bzw. FAD-abhängigen Enzymen am Beispiel zellvermittelter Pathogenzerstörung

Im Rahmen dieses Projektes sollen die Machbarkeit und die Vorteile eines intrazellulären selektiven Enzymnachweises mittels markerfreier zeitaufgelöster fluorenzmikroskopischer Methoden（mono- und biexponentielles FLIM und FAIM，d.h. Bzw.辅酶NADH、NAD（P）H和FAD作为内源性信号转导物被韦尔登、NAD（P）H和FAD抑制。Hierfür韦尔登实验一个NADH，NADPH和FAD abhängigen酶sowohl unter extra- als auch unter intrazellulären Bedingungen durchgeführt。Dieses Vorhaben ist von allgemeiner Relevanz für die Biowissenschaften，da der intrazelluläre Enzymnachweis mit einer direkten hoch aufgelösten Erfassung vitaler von den entsprechenden Enzymen katalysierter Prozesse gleichzusetzen ist.我们认为，NADPH氧化酶和NADPH抑制酶在烟草病原体中起着重要作用，在烟草粒细胞中也起着重要作用。通过动物保护方法（FLIM和FAIM）可使细胞内NADPH氧化酶活化的动力学和局部活化提高韦尔登。这些研究不仅在体外实验中进行，而且在韦尔登的生命器官中也进行了研究，以获得一种新的双光子显微镜。一种NADPH氧化酶活性的测定方法是在第三代Zellen中进行的。

Im Rahmen dieses Projektes sollen die Machbarkeit und die Vorteile eines intrazellulären selektiven Enzymnachweises mittels markerfreier zeitaufgelöster fluoreszenzmikroskopischer Methoden (mono- und biexponentielles FLIM und FAIM, d.h. Fluoreszenzlebensdauer bzw. Fluoreszenzanisotropie Imaging) erforscht werden, die die Coenzyme NADH, NAD(P)H und FAD als endogene Signalvermittler benutzen. Hierfür werden Experimente an NADH, NADPH und FAD abhängigen Enzymen sowohl unter extra- als auch unter intrazellulären Bedingungen durchgeführt. Dieses Vorhaben ist von allgemeiner Relevanz für die Biowissenschaften, da der intrazelluläre Enzymnachweis mit einer direkten hoch aufgelösten Erfassung vitaler von den entsprechenden Enzymen katalysierter Prozesse gleichzusetzen ist. Als konkretes Beispiel mit besonderer biowissenschaftlicher Bedeutung wurde die NADPH Oxidase ausgewählt, ein NADPH abhängiges Enzym, das eine zentrale Rolle in der zellvermittelten Pathogenzerstörung sowohl in pflanzlichen (Nicotiana tabacum) als auch in tierischen Zellen (neutrophilen Granulozyten) hat. Mit Hilfe der vorgeschlagenen Methoden (FLIM und FAIM) sollen erstmalig die Kinetik und die Lokalisierung der Aktivierung der NADPH Oxidase intrazellulär aufgeklärt werden. Die Untersuchungen sollen sich nicht nur auf in vitro Experimente beschränken sondern auch in Gewebe und sogar im lebenden Organ durchgeführt werden, wofür die Zweiphotonen-Mikroskopie zum Einsatz kommt. Ein Vergleich der Aktivierung der NADPH Oxidase in pflanzlichen Zellen gegenüber tierischen Zellen ist abschließend geplant.