BRAFシグナル伝達系に対する抑制因子の同定とBRAF変異型大腸癌の治療法開発

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これまでに作成したApc変異型単独型マウス、Apc+変異型Kras(G12V)複合型マウスに加え、今回、新たにApc+変異型Braf(V600E)複合型マウスを作製し、3種類のマウス各5匹から大腸腫瘍を各2-4個回収し、そこからtotal RNAを抽出、RNAのクオリティをチェックして各グループ最低3サンプルをラベリングし、網羅的遺伝子発現解析をaffymetrix社のDNAチップ（Mouse Gene 1.0 ST Array）を用いて行った。1次スクリーニング（in silico）として、これらのうち、Apc単独型で発現が低く、Apc+変異型Kras(G12V)複合型マウスならびにApc+変異型Braf(V600E)複合型マウスで発現の高い遺伝子を検索した。これにより、従来のRASのシグナル伝達系の下流の標的分子に含まれないFactor Xの候補遺伝子（Braf変異により造腫瘍能抑制因子の候補遺伝子）を約100個まで絞り込んだ。現在、候補遺伝子の絞り込み（遺伝子発現解析による）を目的として、3種類のマウス腫瘍、既存の大腸癌細胞株、ならびにヒトの大腸癌組織（KRAS/BRAF野生型、KRAS変異型、BRAF変異型が既知のもの）での候補標的分子の遺伝子発現をreal time PCRで検討し、約20個前後に候補遺伝子を絞り込むとともに、抗体が入手可能なものについては免疫染色法により候補遺伝子の絞り込みを約20まで行った。（2次スクリーニング）。