核内ターゲティング可能なPHプローブ開発のための基礎研究

开发核靶向PH探针的基础研究

• 批准号: 09878143
• 负责人: 井上 敬
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878143/
• 关键词: 蛍光顕微測光; pH; GFP; 細胞性粘菌

本研究課題では、核内ターゲティング可能なpHプローブを開発するための基礎研究として、(1)pH依存性の変異GFPの作成と、(2)効率の良いスクリーニング法の確立、(3)変異GFPの核内での希望する部域での発現を目指している。さらに、このようなプローブを用いた研究が有用であるためには、(4)生きた細胞を様々な生理的状態に保ちつつ蛍光顕微測光により測定が行えることが必要である。研究計画の第1年度では、このなかでとくに(2)と(4)で大きな成果が得られた。性能の良い干渉フィルターを備えた高輝度光源と、コンピュータにつないだ高感度ビデオカメラを用いることにより、多数のバクテリアまたは細胞性粘菌のコロニーの発する蛍光を同時に定量・解析することが可能になり、効率の良いスクリーニングの見通しが立った。一方、実際の測定時には、調べようとしている状況、たとえば、発生のある時期に特定の遺伝子の転写がおこる領域の核内pHの測定を行いたいとき、自然な発生の進行を妨げず、しかも励起光による様々な生理的な影響を排除した条件で測定を行うのは一般に容易ではない。これは既存のpHプローブを用いてもまだほとんど達成されていない困難な問題で、今回材料として用いた細胞性粘菌でも、このようなin situ測定はまだ成功していなかった。この点に関しても検討を重ね、様々な蛍光プローブを取り込ませた細胞からなる組織を用いて、自然な発生過程における細胞質pHなどの生理的パラメータの連続的なin situ測定の方法を初めて確立し、いくつかの全く新しい知見を得ることができた。(1)に関しては、まだ所期のものは得られていないが、(2)の成果を用いて、次年度予定の(3)とともに継続して努力を行う。

This research project is aimed at: (1) basic research on the development of potential pH-dependent heterotrophic GFP;(2) establishment of a method for efficient heterotrophic GFP; and (3) partial development of heterotrophic GFP. (4) The physiological state of living cells is determined by microphotometry. In the first year of the research project, the results of the research project were obtained. The performance of high brightness light source, high sensitivity light source, high sensitivity light source, high sensitivity The determination of pH in the nucleus of a certain field is carried out in the middle of the determination of pH in the field, in the middle of the determination of pH in the field. This is a difficult problem to solve with existing pH values, but it is a successful test for cellular slime molds. The method for determining the pH of cytoplasm and physiological pH of cells and tissues in the process of natural development has been established and new knowledge has been obtained. (1)(2) The results of the project are expected to be used in the next year.(3) The project is expected to be carried out in the next year.

项目成果

K.Inouye: "Perusion chamber for single cell studies." "Single Cell Techniques in Signal Transduction Research."eds.B.van Duijn and A.Wiltink,Springer Verlag,Heiderberg.9-18 (1998)

K.Inouye：“用于单细胞研究的灌注室。”

Yoshida,K.et al.: "A voltage-and K^+-dependen tK^+ channel from Dictyostelium discoideum membrane" Biochim.Biophys.Acta. 1325. 178-188 (1997)

Yoshida,K.et al.：“来自盘基网柄菌膜的电压和 K^ 依赖性 tK^ 通道”Biochim.Biophys.Acta。

K.Inouye: "Cytosolic pH and cell movement measurement in Dictyostelium discoideum." "Single Cell Techniques in Signal Transduction Research."eds.B.van Duijn and A.Wiltink,Springer Verlag,Heiderberg.375-397 (1998)

K.Inouye：“盘基网柄菌中的细胞质 p​​H 值和细胞运动测量。”

Y.Maeda, K.Inouye, I.Takeuchi, eds.: "Dictyostelium-A Model System for Cell and Developmental Biology" Universal Academy Press, 510 (1997)

Y.Maeda、K.Inouye、I.Takeuchi 编辑：“盘基网柄菌-细胞和发育生物学模型系统”Universal Academy Press，510 (1997)